[發明專利]一種鑒定黃鱔物種及其產品的方法

在審

• 申請號: 201610002447.1
• 申請日: 2016-01-06
• 公開（公告）號: CN105483258A
• 公開（公告）日: 2016-04-13
• 發明（設計）人: 周榮家;程祎斌;肖遙;程漢華
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春

本發明提供了一個黃鱔特有基因以及利用該基因鑒別黃鱔物種的方法。通過對黃鱔全基因組的深度測序發現了一個黃鱔物種特異的基因（EEL000313.2）。基于該基因序列信息設計引物，通過DNA提取、PCR擴增和凝膠電泳步驟可特異性擴增該基因（EEL000313.2）。本發明可以實現經濟、快速且高效的鑒別黃鱔物種，有助于黃鱔的科研和培育，規范黃鱔肉類銷售市場。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種鑒定黃鱔物種及其產品的方法及專用片段與引物。

背景技術

黃鱔是天然性逆轉動物, 屬于淡水硬骨魚類，合鰓魚目，合鰓魚科。黃鱔在出生初期，即從胚胎期到初次性成熟時都是雌性（即體長在35厘米以下的個體的生殖腺全為卵巢）。在排卵之后，雌性性腺逐漸凋亡，雄性性腺逐漸發育，卵巢逐漸變為精巢；在經歷一個特殊的時期——兼性階段（體長約為36～48厘米）以后，就會發育成完全的雄性（體長53厘米以上者則多為雄性）。整個性逆轉的發育過程是單向的，完成性逆轉的雌性個體不會再次發生性逆轉過程。黃鱔這種天然的性逆轉的現象，使得黃鱔成為了一個研究性別決定和性別發育的良好的模式物種，也使其在生物學、醫學和農業上具有巨大的研究價值和經濟效益。

黃鱔肉嫩味鮮，營養價值甚高。鱔魚中含有豐富的DHA和卵磷脂，它是構成人體各器官組織細胞膜的主要成分，而且是腦細胞不可缺少的營養。故食用鱔魚肉有補腦健身的功效。它所含的特種物質“鱔魚素”，有清熱解毒、涼血止痛、祛風消腫、潤腸止血等功效，能降低血糖和調節血糖，對痔瘡、糖尿病有較好的治療作用，加之所含脂肪極少，因而是糖尿病患者的理想食品。鱔魚含有的維生素A量高得驚人。維生素A可以增進視力，促進皮膜的新陳代謝。黃鱔不僅被當作名菜用來款待客人，近年來活運出口，暢銷國外，更有冰凍鱔魚遠銷美洲等地。黃鱔一年四季均產，但以小暑前后者最為肥美，民間有“小暑黃鱔賽人參”的說法。

但是由于黃鱔養殖較為困難且多以經驗為主，黃鱔肉價格較高，因此市場上有部分假冒黃鱔肉進行銷售，嚴重影響公民飲食健康。目前尚未有通過分子生物學方法鑒定黃鱔肉質的方法報道。

全基因組測序是對未知基因組序列的物種進行個體的基因組測序。全基因組測序的方法是先提取基因組DNA，然后隨機打斷，電泳回收所需長度的DNA片段（0.2~5Kb），加上接頭, 進行基因簇cluster制備或電子擴增E-PCR，最后利用Paired-End（Solexa）或者Mate-Pair（SOLiD）的方法對插入片段進行測序。然后對測得的序列組裝成Contig，通過Paired-End的距離可進一步組裝成Scaffold，進而可組裝成染色體等。組裝效果與測序深度與覆蓋度、測序質量等有關。常用的組裝有：SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。迄今尚未見關于黃鱔全基因組測序的相關文獻。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種鑒定黃鱔物種的方法。

本發明提供的方法，為檢測待測對象的基因組DNA，若基因組DNA中含有目的DNA分子，則所述待測對象為黃鱔。

所述目的DNA分子為Seq NO.1，外顯子個數為1個，位置是chr5： 28889163-28889999。

為實現上述目的，本發明通過對天然性逆轉的硬骨魚類黃鱔基因組進行測序，獲得了黃鱔基因組框架草圖，得到了基因組50倍的序列，ScaffoldN50為967kb,組裝Scaffold為683M。進一步，我們通過基因組數據分析比較不同物種之間基因表達的差異篩選出黃鱔物種特異基因Seq NO.1，并由此確定和驗證候選基因。通過NCBI網站blast搜索結果如圖1，在其他物種中無任何同源基因。

上述檢測待測對象的基因組DNA的方法為測序、PCR或分子雜交；

所述待測對象的基因組DNA來源于離體的待測對象的組織器官或血液。