[發(fā)明專利]一種豬偽狂犬病毒的抑制細胞系有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610001039.4 | 申請日： | 2016-01-05 |
| 公開（公告）號： | CN105505881B | 公開（公告）日： | 2019-02-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 任林柱;彭志園;歐陽婷;馬騰;陳心容;陳福旺;逄大欣;歐陽紅生 | 申請（專利權(quán)）人： | 吉林大學 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/85 |
| 代理公司： | 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100 | 代理人： | 陳宏偉 |
| 地址： | 130011 吉*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 種豬 狂犬病毒 抑制 細胞系 | ||
本發(fā)明提供了一種豬偽狂犬病毒的抑制細胞系，可用于制備無偽狂犬病毒感染的細胞或動物模型，同時提供了相應的制備方法，制備的豬偽狂犬病毒的抑制細胞系含有Cas9核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)和靶向PRV的UL30基因的sgRNA。該細胞對PRV的感染具有顯著的抑制作用。可用于制備無偽狂犬病毒感染的細胞或動物模型，在臨床、實驗室研究上具有廣闊的應用前景。
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了一種豬偽狂犬病毒的抑制細胞系，可用于制備無偽狂犬病毒感染的細胞或動物模型，同時提供了相應的制備方法，屬于細胞生物學技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
偽狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）是發(fā)生于家豬和野豬的病毒病，在世界上的大部分地區(qū)呈地方性流行。牛、羊、貓、狗等家畜和野生哺乳動物都是易感染動物。另外，有文獻報道，該病毒還可以感染人類。
PRV屬于皰診病毒科，與感染人類的單純皰疹病毒（HSV）親緣關(guān)系較近。該病毒的UL30基因編碼DNA復制酶亞基，且其基因序列在皰診病毒科的病毒中保守性較強。因此，UL30基因可以作為皰診病毒科病毒的預防及治療的靶基因。另外，目前國內(nèi)外關(guān)于豬偽狂犬病毒的抑制細胞系的研究尚沒有報道。
發(fā)明內(nèi)容：
本發(fā)明公開了一種豬偽狂犬病毒的抑制細胞系，該細胞可以顯著抑制偽狂犬病毒的感染，可用于制備無偽狂犬病毒感染的細胞或動物模型；
本發(fā)明還提供了豬偽狂犬病毒的抑制細胞系的制備方法，適用于人工制備該細胞系；
本發(fā)明提供的一種豬偽狂犬病毒的抑制細胞系，其特征在于：
該細胞含有Cas9核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)和靶向PRV的UL30基因的sgRNA；該細胞感染PRV后，該sgRNA可以特異結(jié)合到UL30基因的特定位點上，并準確地引導細胞內(nèi)的Cas9核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)將UL30基因特異切斷，導致UL30基因不能表達，從而達到抑制病毒復制的目的；
本發(fā)明公開了一種真核表達載體PX459-PRV，用于構(gòu)建上述的豬偽狂犬病毒抑制細胞系；
本發(fā)明構(gòu)建的真核表達載體PX459-PRV是在PX459載體的基礎(chǔ)上，插入人工合成的DNA片段而成；
本發(fā)明公開的PX459-PRV上插入的人工合成的DNA片段可以在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄為sgRNA，且該sgRNA可以特異地與PRV的UL30基因的特定位點結(jié)合；
本發(fā)明公開的人工合成的DNA序列為：
本發(fā)明所述豬偽狂犬病毒的抑制細胞系的制備方法，包括以下步驟：
1. 人工合成DNA片段
2. 真核表達載體PX459-PRV的構(gòu)建
將上述合成的DNA片段經(jīng)過退火后，連接到真核表達載體PX459的相應酶切位點上，構(gòu)建成真核表達載體PX459-PRV；
3. 豬偽狂犬病毒抑制細胞系的建立
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