[發明專利]一種檢測溶液或細胞中10-7～10-5M低濃度H2O2的方法

有效

• 申請號: 201610001038.X
• 申請日: 2016-01-04
• 公開（公告）號: CN105424670B
• 公開（公告）日: 2018-05-25
• 發明（設計）人: 曾晞;朱勤;牟蘭;吳玉田;張紅;阮琴;李釗
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N21/33;G01N21/78
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務有限公司 52002
• 代理人: 徐逸心;袁慶云

本發明一種檢測溶液或細胞中10?7~10?5M低濃度H2O2的方法，屬分析化學領域。以化合物(E)?2?(2,4?二羥基苯基)乙烯基?8?羥基喹啉為檢測微量H2O2的熒光探針。在乙腈/H2O溶液（v/v，3/2，pH 11）中，利用探針的特征熒光強度或吸光度隨H2O2濃度變化，其它共存氧化或還原物質不干擾測定。熒光法和紫外吸收法檢測H2O2的濃度線性范圍分別為8.3×10?7~4.3×10?5M和8.5×10?7~5.2×10?5 M，檢測限分別為2.3×10?8 M和8.9×10?7M。目視檢測H2O2，日光和紫外燈下探針溶液顏色由橙紅色變為無色。在活細胞內H2O2使探針熒光猝滅，用熒光成像可視檢測細胞內H2O2。

技術領域

本發明屬分析化學領域，具體地說是一種用熒光、紫外-可見吸收檢測微量H2O2及細胞成像的探針方法。

背景技術

生物相關分子、離子的識別檢測在生命、健康及環境研究中尤為重要。小分子熒光探針具有結構簡單、合成簡便、成本低廉、水溶性好、對細胞毒性小等優點，將其應用于生物體系的分子、離子檢測具有靈敏度高、選擇性好、可視性強、快速、簡便的特點。H2O2在體內繼續分解生成超氧陰離子O2-等多種自由基，參與生物細胞的衰老過程，在病理條件、慢性病及正常生理過程中發揮著關鍵作用。過氧化氫進入人體后極易轉變成羥基自由基 (×OH)，這是目前所知活性氧中對生物毒性最強、危害最大的一種自由基，可以直接或間接氧化細胞內大分子(如核酸、蛋白)，破壞細胞膜結構，加速細胞衰老與凋亡，對人體產生極大的危害。有關過氧化氫的測定研究日益受到重視，建立過氧化氫的準確測定方法，從而有效控制過氧化氫的投放量和殘留量顯得尤為重要。目前，過氧化氫的測定主要有電化學法、高效液相色譜法、化學發光法、熒光法、光度法等。其中分光光度法操作簡單、直接，得到較廣泛的應用。

熒光探針與熒光顯微技術的結合，使熒光探針在生物活性物質檢測和細胞成像方面得到廣泛應用。對生物活性物質而言，檢出的靈敏度極限是單個分子而對測試技術有更高的靈敏度要求，同時也有更苛刻的測試條件要求。熒光成像分析是目前廣泛應用于活細胞分析的一種高靈敏的可視化分析技術。活細胞成像技術是生命科學技術領域中重要的研究手段，與固定細胞研究結合起來，可以解釋活細胞中的多種生命現象。

發明內容

本發明目的在于建立一種熒光探針技術，用熒光和紫外-可見吸收光譜方法高靈敏、高選擇性、簡便、快速的檢測溶液或細胞中低濃度微量H2O2光譜測定方法；用熒光顯微鏡可視性檢測活細胞中H2O2的探針成像方法。