[發明專利]一種基于金雜化炭黑插層還原石墨烯的甲胎蛋白電致化學發光傳感器的制備方法

有效

• 申請號: 201610000356.4
• 申請日: 2016-01-03
• 公開（公告）號: CN105486679B
• 公開（公告）日: 2017-04-19
• 發明（設計）人: 魏琴;朱文娟;吳丹;范大偉;孫旭;胡麗華;馬洪敏;張勇;龐雪輝;杜斌
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于金雜化炭黑插層還原石墨烯的甲胎蛋白電致化學發光傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）納米多孔銀-三聯吡啶釕標記的甲胎蛋白抗體溶液的制備

1）納米多孔銀-三聯吡啶釕標記物溶液的制備

將0.1 ~ 10 mg銀鋁合金放入20 ~ 500 mL、濃度為0.5 ~ 1.5 mol/L的氫氧化鈉溶液中，室溫下化學腐蝕12 ~ 36 h，5000 ~ 8000 r/min下離心洗滌4 ~ 8次，在真空干燥箱里干燥24 ~ 48 h，制得納米多孔銀；將1 ~ 3 mg的納米多孔銀分散到1 ~ 10 mL超純水中，加入1 ~ 5 mL、濃度為0.5 ~ 1.5 mmol/L的三聯吡啶釕溶液，室溫避光振蕩12 ~ 36 h，4000 ~ 8000 r/min下離心洗滌3 ~ 9次，將產物重新分散到1 mL超純水中，得到納米多孔銀-三聯吡啶釕標記物溶液；

2）納米多孔銀-三聯吡啶釕標記的甲胎蛋白抗體溶液的制備

將1 mL、濃度為1 ~ 3 mg/mL的納米多孔銀-三聯吡啶釕標記物溶液與100 ~ 500 μL、濃度為5 ~ 15 μg/mL甲胎蛋白檢測抗體混合，振蕩12 ~ 36 h，4000 ~ 6000 r/min下離心洗滌10 ~ 20 min，得到納米多孔銀-三聯吡啶釕標記的甲胎蛋白抗體孵化物，將其分散于1 mL、pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，制得納米多孔銀-三聯吡啶釕標記的甲胎蛋白抗體溶液；

（2）電致化學發光免疫傳感器的制備方法

1）將直徑為4 mm的玻碳電極用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化鋁拋光粉依次做拋光處理，用超純水沖洗干凈；

2）將2 ~ 10 μL、濃度為1 ~ 3 mg/mL的甲胎蛋白抗體捕獲基底材料金雜化炭黑插層還原石墨烯溶液于電極表面，4 ℃保存；

3）用3 ~ 9 μL、質量分數為0.5 ~ 1.5%的牛血清白蛋白溶液封閉非特異性活性位點，于4 ℃冰箱中孵化1 ~ 5 h，清洗干凈；

4）將2 ~ 6 μL濃度為0.0001 ~ 30 ng/mL的一系列不同濃度的甲胎蛋白用于捕獲抗體的特異性識別，室溫下孵化1 h，清洗干凈；

5）將4 ~ 8 μL濃度為1 ~ 3 mg/mL的納米多孔銀-三聯吡啶釕標記的甲胎蛋白抗體溶液滴在電極上與抗原特異性識別，室溫下孵化1 h，清洗干凈，于4 ℃冰箱中儲存備用。

2.如權利要求1所述的一種基于金雜化炭黑插層還原石墨烯的甲胎蛋白電致化學發光傳感器的制備方法，所述甲胎蛋白抗體捕獲基底材料—金雜化炭黑插層還原石墨烯溶液的制備，其特征在于，包括以下步驟：

（1）炭黑插層還原石墨烯復合材料的制備

將25 ~ 75 mg氧化石墨烯加入到25 ~ 75 mL去離子水中，室溫下超聲2 h，得到溶液A；稱取2 ~ 300 mg炭黑分散在8 ~ 120 mL的N,N-二甲基甲酰胺中，室溫下超聲2 h，得到溶液B；將1 ~ 100 mL溶液A加入到1 ~ 100 mL溶液B中，室溫下超聲分散2 h，加入5 ~ 15 μL、體積分數為80 %的水合肼溶液，劇烈振蕩5 min，100 ℃下加熱1 ~ 5 h，5000 ~ 8000 r/min下離心洗滌10 ~ 30 min，制得炭黑插層還原石墨烯復合材料；

（2）金雜化炭黑插層還原石墨烯溶液的制備

將1 ~ 3 mg炭黑插層還原石墨烯分散到1 mL超純水中，加入0.5 ~ 1.5 mL金溶膠，得到的混合溶液在室溫下振蕩12 ~ 36 h，5000 ~ 8000 r/min下離心洗滌10 ~ 30 min，制得金雜化炭黑插層還原石墨烯；將金雜化炭黑插層還原石墨烯重新分散于1 mL超純水中，得到基底材料金雜化炭黑插層還原石墨烯溶液；

（3）甲胎蛋白抗體捕獲基底材料—金雜化炭黑插層還原石墨烯溶液的制備

將1 mL、濃度為1 ~ 3 mg/mL的金雜化的炭黑插層還原石墨烯溶液與100 ~ 300 μL、濃度為5 ~ 15 μg/mL的甲胎蛋白捕獲抗體混合，振蕩12 h，4000 ~ 6000 r/min下離心洗滌10 ~ 20 min，得到甲胎蛋白抗體捕獲基底材料—金雜化炭黑插層還原石墨烯孵化物，將其分散于1 ~ 3 mL、pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，制得甲胎蛋白抗體捕獲基底材料—金雜化炭黑插層還原石墨烯溶液。