[發(fā)明專利]修飾的膜滲透性有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201580084443.6 | 申請(qǐng)日： | 2015-11-09 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN108368477B | 公開(kāi)（公告）日： | 2020-10-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 周豪宏;于麗珺;劉修才 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 上海凱賽生物技術(shù)股份有限公司;CIBT美國(guó)公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N1/21 | 分類號(hào)： | C12N1/21;C12N15/52;C12P13/04 |
| 代理公司： | 北京律智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11438 | 代理人： | 于寶慶;崔香丹 |
| 地址： | 201203 上海市浦東新區(qū)上*** | 國(guó)省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 修飾 滲透性 | ||
1.一種遺傳修飾的宿主細(xì)胞，其包含編碼OMP孔蛋白多肽的異源核酸，其中宿主細(xì)胞過(guò)表達(dá)OMP孔蛋白多肽并且相對(duì)于未修飾的對(duì)應(yīng)宿主細(xì)胞具有增加的氨基酸或氨基酸衍生物的產(chǎn)生，其中氨基酸是賴氨酸并且氨基酸衍生物是尸胺；其中OMP孔蛋白多肽是OmpA、OmpC、OmpF或OmpW孔蛋白多肽且其氨基酸序列分別如SEQ ID NO：4、6、8或16所示；其中所述宿主細(xì)胞是埃希氏菌屬(Escherichia)、哈夫尼菌屬(Hafnia)的宿主細(xì)胞；并且其中宿主細(xì)胞還過(guò)表達(dá)賴氨酸脫羧酶時(shí)，宿主細(xì)胞還是棒狀桿菌屬(Corynebacterium)的宿主細(xì)胞。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的遺傳修飾的宿主細(xì)胞，其中編碼OMP孔蛋白多肽的異源核酸由導(dǎo)入細(xì)胞中的表達(dá)載體編碼，其中表達(dá)載體包含有效地連接至啟動(dòng)子的異源核酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的遺傳修飾的宿主細(xì)胞，其中OMP孔蛋白多肽對(duì)于宿主細(xì)胞是內(nèi)源的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的遺傳修飾的宿主細(xì)胞，其中異源核酸整合至宿主染色體中。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的遺傳修飾的宿主細(xì)胞，其中宿主細(xì)胞過(guò)表達(dá)賴氨酸脫羧酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的遺傳修飾的宿主細(xì)胞，其中宿主細(xì)胞過(guò)表達(dá)一種或多種賴氨酸生物合成多肽。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的遺傳修飾的宿主細(xì)胞，其中宿主細(xì)胞過(guò)表達(dá)TetA多肽。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的遺傳修飾的宿主細(xì)胞，其中宿主細(xì)胞是大腸桿菌(Escherichia coli)、蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)或谷氨酸棒狀桿菌(Corynebacteriumglutamicum)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的遺傳修飾的宿主細(xì)胞，其中宿主細(xì)胞是大腸桿菌(Escherichia coli)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的遺傳修飾的宿主細(xì)胞，其中宿主細(xì)胞是蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的遺傳修飾的宿主細(xì)胞，其中宿主細(xì)胞過(guò)表達(dá)賴氨酸脫羧酶多肽。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的遺傳修飾的宿主細(xì)胞，其中宿主細(xì)胞過(guò)表達(dá)LysC、DapA、LysA、Asd、DapB、AspC和TetA多肽。
13.一種產(chǎn)生氨基酸或氨基酸衍生物的方法，所述方法包括在OMP孔蛋白多肽過(guò)表達(dá)的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的宿主細(xì)胞，其中氨基酸是賴氨酸并且氨基酸衍生物是尸胺。
14.一種工程化宿主細(xì)胞以增加氨基酸或氨基酸衍生物的產(chǎn)生的方法，所述方法包括將編碼OMP孔蛋白多肽的異源核酸導(dǎo)入宿主細(xì)胞中，并在表達(dá)異源OMP孔蛋白多肽的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞，其中相對(duì)于未修飾的對(duì)應(yīng)對(duì)照宿主細(xì)胞，OMP孔蛋白多肽的表達(dá)增加氨基酸或氨基酸衍生物的產(chǎn)生，其中氨基酸是賴氨酸并且氨基酸衍生物是尸胺；其中OMP孔蛋白多肽是OmpA、OmpC、OmpF或OmpW孔蛋白多肽且其氨基酸序列分別如SEQ ID NO：4、6、8或16所示；其中所述宿主細(xì)胞是埃希氏菌屬(Escherichia)、哈夫尼菌屬(Hafnia)的宿主細(xì)胞；并且其中宿主細(xì)胞還過(guò)表達(dá)賴氨酸脫羧酶時(shí)，宿主細(xì)胞還是棒狀桿菌屬(Corynebacterium)的宿主細(xì)胞。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中編碼OMP孔蛋白多肽的異源核酸由導(dǎo)入細(xì)胞中的表達(dá)載體編碼，其中表達(dá)載體包含有效地連接至啟動(dòng)子的異源核酸。
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