[發(fā)明專利]培養(yǎng)細胞的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201580084341.4
• 申請日: 2015-09-15
• 公開（公告）號: CN108350420A
• 公開（公告）日: 2018-07-31
• 發(fā)明（設計）人: 韋恩·喬治·克萊因特耶斯
• 申請（專利權）人: 斯坦陵布什大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61K35/36;A61L27/60;A61P17/02;C12M3/00
• 代理公司: 北京超凡志成知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 王暉;許洪潔

描述了培養(yǎng)自體細胞的方法以及治療哺乳動物患者的方法。細胞培養(yǎng)在基質(zhì)材料上，該基質(zhì)材料具有用脂肪酸酯處理的表面以便具有強疏水表面，并且從患者的血液樣品中獲得的自體血漿用作生長培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。基質(zhì)材料也用作用于將培養(yǎng)的細胞轉(zhuǎn)移至患者的轉(zhuǎn)移敷料，以及用作傷口覆蓋敷料。本發(fā)明還描述了使用該培養(yǎng)方法來培養(yǎng)自體細胞的試劑盒以及系統(tǒng)。

技術領域

本發(fā)明涉及培養(yǎng)細胞的方法，且特別涉及培養(yǎng)用于制備培養(yǎng)的上皮自體移植物(epithelial autograft)(CEA)的自體細胞的方法，以及通過移植由本發(fā)明方法培養(yǎng)的自體細胞來治療哺乳動物患者的方法，且特別用于治療燒傷受害者。

背景技術

第一種培養(yǎng)的上皮自體移植物(CEA)由Rheinwald和Green實現(xiàn)(Serialcultivation of strains of human epidermal keratinocytes:the formation ofkeratinizing colonies from single cells,Cell.1975,6:331-344)。自此來自培養(yǎng)的細胞的皮膚移植物被頻繁地使用于治療皮膚缺陷，諸如燒傷。

然而，還存在一些沒有完全解決的相關缺點，諸如例如，易碎的表皮片和在將移植物從培養(yǎng)環(huán)境轉(zhuǎn)移到患者期間可能持續(xù)的結構損傷、“移植物成活率(graft take)”差和微生物污染等。

市售的培養(yǎng)的上皮自體移植物(CEA)產(chǎn)品諸如EPICEL已充分用于治療嚴重的燒傷受害者。市售產(chǎn)品潛在的問題是它們使用的動物產(chǎn)品可能并不總是與人類患者能免疫相容。如EPICEL的產(chǎn)品已經(jīng)克服了那些相容性問題中的一些，但以巨大的代價使得該產(chǎn)品過于昂貴，特別是在像非洲和其他第三世界國家的地區(qū)，在那里患者難以負擔基本的保健治療。

在市售產(chǎn)品不易獲得的地方，可能需要在當?shù)嘏囵B(yǎng)皮膚。考慮到在運輸此類移植細胞期間無菌性和結構完整性的實際擔憂，合適的實驗室與醫(yī)院的距離使得這并不總是可行的選擇。

Barlow(美國專利No 6,039,972)描述了一種適形的傷口敷料，其通過生產(chǎn)錨定于合成聚合物膜表面的培養(yǎng)的上皮細胞的亞匯合層來制備，該合成聚合物膜是疏水的、對細胞生長無抑制性并且無細胞毒性。該膜需要在細胞培養(yǎng)之前或之后通過穿孔形成的孔。細胞的生長發(fā)生在通常使用的含有胎牛血清的生長培養(yǎng)基中。

Rennekampf等人(Wound closure with human keratinocytes cultured on apolyurethane dressing overlaid on a cultured human dermal replacement,Surgery,1996,120:16-22)描述了在聚氨酯片上將人角質(zhì)細胞(HK)片培養(yǎng)成單層，其是合成的親水敷料。HK是從人類尸體供體皮膚獲得的，且只有61％的受試動物實現(xiàn)了陽性移植物成活率。

Van Dorp等人(A modified culture system for epidermal cells forgrafting purposes:an in vitro and in vivo study,Wound Repair Regen.1999,7(4):214-225)在聚酯填料基質(zhì)上培養(yǎng)了人類和豬的表皮角質(zhì)細胞。然而，他們發(fā)現(xiàn)，成功的上皮再生只在細胞片通過使用分散酶(Dispase)酶處理而隨之從基質(zhì)脫附時才可能。已知使用分散酶酶促脫附能損壞可用于傷口愈合過程的某些細胞。