[發明專利]核酸測序方法和系統

有效

• 申請號: 201580081843.1
• 申請日: 2015-07-21
• 公開（公告）號: CN107849605B
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 康達斯瓦米·維加亞恩;尤金·圖;馬克·A·伯納德
• 申請（專利權）人: 歐姆尼歐美公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.一種用于對模板核酸分子進行測序的方法，所述方法包括：

檢查步驟，所述檢查步驟包括：

(a)提供用引物引發的模板核酸分子，其中所述引物在3’端包含可逆終止子部分；

(b)使所述引發的模板核酸分子與包含多種聚合酶和第一未標記的核苷酸分子的第一反應混合物接觸，

其中當所述第一未標記的核苷酸分子與所述引發的模板核酸分子的下一個堿基互補時，所述引發的模板核酸分子、聚合酶以及所述第一未標記的核苷酸分子能夠形成三元復合物，并且

其中當所述第一未標記的核苷酸分子與所述引發的模板核酸分子的下一個堿基不互補時，所述引發的模板核酸分子和所述聚合酶能夠形成二元復合物，

(c)在所述第一未標記的核苷酸分子存在下，并且在所述第一未標記的核苷酸分子沒有化學摻入到所述引發的模板核酸分子的引物中的情況下，監測所述聚合酶與所述引發的模板核酸分子的相互作用；以及

(d)通過步驟(c)的所述監測的相互作用鑒定與所述引發的模板核酸分子的下一個堿基互補的所述核苷酸。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述方法還包括將步驟(b)和(c)重復一次或多次。

3.根據權利要求2所述的方法，其中使用包含所述聚合酶和第二未標記的核苷酸分子的第二反應混合物重復步驟(b)。

4.根據權利要求3所述的方法，所述方法還包括使用包含所述聚合酶和第三未標記的核苷酸分子的第三反應混合物重復步驟(b)。

5.根據權利要求4所述的方法，所述方法還包括使用包含所述聚合酶和第四未標記的核苷酸分子的第四反應混合物重復步驟(b)。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其中所述接觸在使所述三元復合物的形成穩定的條件下發生。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中所述接觸在使所述二元復合物的形成不穩定的條件下發生。

8.根據權利要求6所述的方法，其中所述條件包括使所述引發的核酸分子與調節滲透壓的緩沖液接觸。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述第一反應混合物包含調節滲透壓的所述緩沖液。

10.根據權利要求8或9所述的方法，其中所述緩沖液是高鹽緩沖液。

11.根據權利要求8或9所述的方法，其中所述緩沖液包含谷氨酸鉀。

12.根據權利要求6所述的方法，其中使所述三元復合物的形成穩定的所述條件包括使所述引發的核酸分子與穩定劑接觸。

13.根據權利要求1至12中任一項所述的方法，其中所述第一反應混合物包含穩定劑。

14.根據權利要求12或13所述的方法，其中所述穩定劑是非催化性金屬離子。

15.根據權利要求14所述的方法，其中所述非催化性金屬離子是鍶、錫或鎳。

16.根據權利要求1至15中任一項所述的方法，所述方法還包括在步驟(d)之前的洗滌步驟，其中所述洗滌步驟去除任何二元復合物。

17.根據權利要求16所述的方法，其中所述洗滌步驟在使所述三元復合物穩定的條件下進行。

18.根據權利要求17所述的方法，其中所述條件包括穩定劑。

19.根據權利要求18所述的方法，其中所述穩定劑是非催化性金屬離子。