[發(fā)明專利]HCV NS4A/經(jīng)修飾的NS3多肽及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580078268.X
• 申請(qǐng)日: 2015-06-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107735499B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: D·Y·近;D·G·科伊特;藤原俊哉;A·杰納什;J·A·霍爾;A·梅迪納-塞爾比;鄭建
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 奧索臨床診斷有限公司;奧索臨床診斷株式會(huì)社;基立福環(huán)球運(yùn)營(yíng)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;G01N33/53;G01N33/567;G01N33/00;C07H21/04
• 代理公司: 隆天知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 72003
• 代理人: 王芝艷;吳小瑛

1.一種包含多肽的免疫測(cè)定試劑，所述多肽包含：

具有SEQ ID NO:3的丙型肝炎病毒NS4a結(jié)構(gòu)域；

具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的經(jīng)修飾的丙型肝炎病毒NS3結(jié)構(gòu)域，其中SEQ ID NO:4在137位的氨基酸殘基置換為丙氨酸，使得所述經(jīng)修飾的丙型肝炎病毒NS3結(jié)構(gòu)域的蛋白酶活性相對(duì)于缺乏所述置換的具有SEQ ID NO:4的丙型肝炎病毒NS3結(jié)構(gòu)域的蛋白酶活性受到抑制；以及

間插區(qū)，其將所述NS4a結(jié)構(gòu)域的羧基末端連接至所述經(jīng)修飾的NS3結(jié)構(gòu)域的氨基末端。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫測(cè)定試劑，其中所述多肽的間插區(qū)具有氨基酸序列SGS。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫測(cè)定試劑，其中所述多肽具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫測(cè)定試劑，其結(jié)合至固體支持體。

5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的免疫測(cè)定試劑在制備用于檢測(cè)生物樣品中的丙型肝炎病毒抗體的免疫測(cè)定試劑中的用途，所述檢測(cè)包括：

(a)提供根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的免疫測(cè)定試劑；

(b)將生物樣品與所述免疫測(cè)定試劑在允許丙型肝炎病毒抗體在存在于所述生物樣品中時(shí)與所述免疫測(cè)定試劑結(jié)合的條件下合并，以形成第一免疫復(fù)合物；

(c)向得自步驟(b)的所述第一免疫復(fù)合物中加入標(biāo)記檢測(cè)劑，其中所述標(biāo)記檢測(cè)劑與所述第一免疫復(fù)合物反應(yīng)；

(d)如果存在，檢測(cè)所述標(biāo)記檢測(cè)劑與所述第一免疫復(fù)合物之間形成的第二免疫復(fù)合物，作為所述生物樣品中丙型肝炎病毒抗體存在的指示。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中所述標(biāo)記檢測(cè)劑是標(biāo)記抗體或標(biāo)記抗原。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其中所述免疫測(cè)定試劑結(jié)合至固體支持體。

8.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的免疫測(cè)定試劑在制備用于檢測(cè)生物樣品中丙型肝炎病毒抗體和/或丙型肝炎病毒抗原的免疫測(cè)定試劑中的用途，所述檢測(cè)包括：

(a)提供根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的免疫測(cè)定試劑；

(b)將生物樣品與所述免疫測(cè)定試劑以及一種或多種抗-HCV抗體在下述條件下合并，所述條件允許丙型肝炎病毒抗體在存在于所述生物樣品中時(shí)與所述免疫測(cè)定試劑結(jié)合以形成第一免疫復(fù)合物，并且還允許丙型肝炎病毒抗原在存在于所述生物樣品中時(shí)與所述抗-HCV抗體結(jié)合以形成第二免疫復(fù)合物；

(c)向得自步驟(b)的所述第一免疫復(fù)合物中加入第一標(biāo)記檢測(cè)劑，其中所述第一標(biāo)記檢測(cè)劑與所述第一免疫復(fù)合物反應(yīng)，并且向得自步驟(b)的所述第二免疫復(fù)合物中加入第二標(biāo)記檢測(cè)劑，其中所述第二標(biāo)記檢測(cè)劑與所述第二免疫復(fù)合物反應(yīng)；

(d)如果存在，檢測(cè)所述第一標(biāo)記檢測(cè)劑與所述第一免疫復(fù)合物之間形成的第三免疫復(fù)合物，并且如果存在，檢測(cè)所述第二標(biāo)記檢測(cè)劑與所述第二免疫復(fù)合物之間形成的第四免疫復(fù)合物，作為所述生物樣品中丙型肝炎病毒抗體和/或丙型肝炎病毒抗原存在的指示。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其中所述第一標(biāo)記檢測(cè)劑和所述第二標(biāo)記檢測(cè)劑各自為標(biāo)記抗體或標(biāo)記抗原。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其中一種或多種所述免疫測(cè)定試劑和所述一種或多種抗-HCV抗體結(jié)合到相同或不同的固體支持體。

11.一種免疫診斷測(cè)試試劑盒，其包括根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的免疫測(cè)定試劑，以及用于實(shí)施所述免疫診斷測(cè)試的說(shuō)明書(shū)。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的免疫診斷測(cè)試試劑盒，其還包括一種或多種抗-HCV抗體。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的免疫診斷測(cè)試試劑盒，其中所述一種或多種抗-HCV抗體是抗-HCV核心抗體。