[發明專利]增強的蛋白質表達

有效

• 申請號: 201580076140.X
• 申請日: 2015-12-11
• 公開（公告）號: CN107278230B
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: C·邦焦爾尼;R·I·克里斯坦森;B·F·施密特;A·范齊蒙耐德
• 申請（專利權）人: 丹尼斯科美國公司
• 主分類號: C12N15/75
• 分類號: C12N15/75;C12N1/21;C12R1/07
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

1.一種用于在枯草芽孢桿菌細菌細胞中增加感興趣的蛋白質(POI)的表達的方法，其中所述POI為重組引入的異源蛋白酶，其中該方法包括：

(a)獲得產生POI的經改變的枯草芽孢桿菌細菌細胞，其中所述經改變的枯草芽孢桿菌細菌細胞包含SEQ ID NO:1所示序列的kinA基因的缺失；并且

(b)在表達所述POI的條件下培養所述經改變的枯草芽孢桿菌細菌細胞，

其中該POI的增加的表達是相對于未經改變的枯草芽孢桿菌細菌細胞中相同POI的表達而言的。

2.如權利要求1所述的方法，其中步驟(b)的經改變的枯草芽孢桿菌細菌細胞還包含降低phrA和/或phrE基因的表達的遺傳改變。

3.如權利要求1所述的方法，其中步驟(b)的經改變的枯草芽孢桿菌細菌細胞還包含降低phrA的表達的遺傳改變和降低phrE的表達的遺傳改變。

4.如權利要求2所述的方法，其中該遺傳改變進一步被定義為phrA mRNA轉錄物水平的降低和/或phrE mRNA轉錄物水平的降低。

5.如權利要求1所述的方法，其中該POI的表達的增加進一步被定義為該POImRNA轉錄物水平的增加。

6.如權利要求1所述的方法，其中該經改變的枯草芽孢桿菌細菌細胞和該未經改變的枯草芽孢桿菌細菌細胞進一步包含至少一個有缺陷或無活性的孢子形成基因。

7.如權利要求2或3所述的方法，其中所述遺傳改變是phrA、和phrE基因中的一個或多個的全部或部分的缺失。

8.如權利要求2或3所述的方法，其中所述遺傳改變導致PhrA、和PhrE蛋白中的一種或多種的活性的降低。

9.如權利要求1所述的方法，進一步包括回收該POI。

10.如權利要求1所述的方法，其中相對于該未經改變的革蘭氏陽性細胞，所表達的POI的增加的量是增加至少10％。

11.一種經改變的枯草芽孢桿菌細菌細胞，該經改變的枯草芽孢桿菌細菌細胞相對于未經改變的枯草芽孢桿菌細菌細胞中的POI的表達，表達了增加的量的相同POI，其中所述POI為重組引入的異源蛋白酶，其中該經改變的細菌細胞包含SEQ ID NO:1所示序列的kinA基因的缺失。

12.如權利要求11所述的經改變的細胞，其中該經改變的細胞還包含降低phrA和/或phrE基因的表達的遺傳改變。

13.如權利要求11所述的經改變的細胞，其中該經改變的細胞還包含降低phrA的表達的遺傳改變和降低phrE的表達的遺傳改變。

14.如權利要求11所述的經改變的細胞，其中該經改變的細胞和該未經改變的細胞進一步包含至少一個有缺陷或無活性的孢子形成基因。

15.如權利要求12所述的經改變的細胞，其中所述遺傳改變進一步被定義為phrA mRNA轉錄物水平的降低和/或phrE mRNA轉錄物水平的降低。

16.如權利要求12所述的經改變的細胞，其中降低phrA基因或phrE基因的表達的所述遺傳改變是phrA、和phrE基因的全部或部分的缺失。

17.如權利要求12所述的經改變的細胞，其中所述遺傳改變導致PhrA、和/或PhrE蛋白的活性降低。

18.如權利要求11所述的經改變的細胞，進一步包括回收該POI。

19.如權利要求11所述的經改變的細胞，其中相對于該未經改變的枯草芽孢桿菌細胞，所表達的POI的增加的量是增加至少10％。