[發明專利]新的豬正呼腸孤病毒的疫苗和診斷

在審

• 申請號: 201580073450.6
• 申請日: 2015-11-17
• 公開（公告）號: CN107427572A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 孟祥津;曹殿軍;A·納拉亞納帕;E·蘇比亞
• 申請（專利權）人: 弗吉尼亞暨州立大學知識產權公司
• 主分類號: A61K39/15
• 分類號: A61K39/15;C12Q1/68;G01N33/569
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙)11277
• 代理人: 劉新宇,李茂家

1.一種賦予對POV3-VT的免疫性的疫苗，其包含免疫原性數量的一種或多種類型特異性POV3-VT蛋白或其免疫原性部分。

2.根據權利要求1所述的疫苗，其中所述類型特異性POV3-VT蛋白選自由σ1、σ1s、μ1和μ2蛋白以及其免疫原性部分組成的組。

3.根據權利要求1所述的疫苗，其中所述一種或多種類型特異性POV3-VT蛋白或其免疫原性部分處于減毒活病毒疫苗中。

4.根據權利要求1所述的疫苗，其中所述一種或多種類型特異性POV3-VT蛋白或其免疫原性部分存在于滅活病毒疫苗中。

5.根據權利要求1所述的疫苗，其中所述一種或多種類型特異性POV3-VT蛋白或其免疫原性部分存在于亞單位疫苗中。

6.根據權利要求5所述的疫苗，其中所述一種或多種類型特異性POV3-VT蛋白或其免疫原性部分是在細菌或桿狀病毒表達系統中生產的。

7.一種賦予對POV3-VT的免疫性的疫苗，其包含MRV3σ1蛋白或其免疫原性多肽部分，其中所述MRV3σ1蛋白與SEQ ID NO：20的氨基酸殘基1到455具有至少92％的同一性。

8.一種減毒的POV3-VT活病毒疫苗，其中所述疫苗是通過POV3-VT病毒在非豬宿主中傳代直到傳代的病毒在接種給豬時能賦予免疫性而不引起流行性腹瀉而開發的。

9.一種使豬對POV3-VT病毒感染免疫的方法，其包括向所述豬施用免疫有效量的根據權利要求1-8中任一項所述的疫苗，其中所述疫苗組合物包含有效量的至少一種類型特異性POV3-VT抗原。

10.一種檢測動物的POV3-VT病毒感染的方法，其包括提供來自所述動物的樣品，以及檢測所述樣品中特異性結合至多肽的抗體的存在或缺乏，所述多肽包含POV3-VTtσ1蛋白、或其免疫原性多肽部分(SEQ ID NO：20)，其中檢測所述樣品中特異性結合所述多肽的抗體的存在或缺乏包括，使用能夠檢測抗體與蛋白的特異性結合的基于抗體的技術，所述樣品中的抗體與所述多肽的特異性結合的檢測檢測到所述動物被POV3-VT病毒感染。

11.根據權利要求10所述的方法，其中所述能夠檢測抗體與蛋白的特異性結合的基于抗體的技術包括選自由以下組成的組的技術：免疫組織化學分析、放射免疫分析、酶聯免疫吸附分析ELISA、夾心免疫分析、免疫輻射計量分析、凝膠擴散沉淀反應、免疫擴散分析、原位免疫分析、蛋白質印跡、沉淀反應、凝集分析、補體結合分析、免疫熒光分析、蛋白A分析和免疫電泳分析。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述凝集分析包括血細胞凝集抑制分析。

13.根據權利要求11所述的方法，其中所述能夠檢測抗體與蛋白的特異性結合的基于抗體的技術包括酶聯免疫吸附分析ELISA。

14.一種檢測生物樣品中的POV3-VT的方法，其包括：在適合于聚合酶鏈式反應的條件下，使用與POV3-VT的S1片段內的區域同源的正向和反向引物擴增POV3-VT S1片段核苷酸序列來產生擴增產物；并測量所述擴增產物來檢測所述生物樣品中的POV3-VT。

15.根據權利要求14所述的方法，其中所述正向S1引物是具有序列5'-CAC TCT GAT ACA ATC CTT AGG ATC ACT CAA GG 3'(SEQ ID NO：3)的分離的核苷酸。

16.根據權利要求14所述的方法，其中所述反向S1引物是具有序列5'-CCA TCG TCA TAC GAT TGT TAT TGA TTG CCA 3'(SEQ ID NO：4)的分離的核苷酸。

17.根據權利要求14所述的方法，其進一步包括在適合于聚合酶鏈式反應的條件下擴增POV3-VT的L1片段；并測量所述擴增產物來檢測所述生物樣品中的POV3-VT。

18.根據權利要求17所述的方法，其中所述正向L1引物是具有序列5'-CTA TAC TAG CTG ACA CTT CGA TGG GAT TGC 3'(SEQ ID NO：5)的分離的核苷酸。