[發(fā)明專利]用于靶核酸多重檢測的雙重猝滅測定有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201580071965.2 | 申請日： | 2015-12-22 |
| 公開（公告）號： | CN107109492B | 公開（公告）日： | 2021-02-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | U·V·施奈德;S·M·艾克沃德;N·D·米克爾森 | 申請（專利權(quán)）人： | 阿納帕生物技術(shù)股份公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6816 | 分類號： | C12Q1/6816;C12Q1/44 |
| 代理公司： | 北京市鑄成律師事務(wù)所 11313 | 代理人： | 王建秀;郗名悅 |
| 地址： | 丹麥，赫*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 核酸 多重 檢測 雙重 測定 | ||
1.一種用于檢測靶核酸序列的方法，所述方法包括以下步驟：
(a)將所述靶核酸序列與探測和標(biāo)記寡核苷酸(PTO)雜交；所述PTO包含(i)包含與所述靶核酸序列基本上互補(bǔ)的核苷酸序列的靶向部分，以及(ii)包含與所述靶核酸序列不互補(bǔ)的核苷酸序列的解鏈溫度決定區(qū)(MTDR)，以及(iii)至少一組相互作用標(biāo)記，包括至少一個(gè)熒光團(tuán)和至少一個(gè)猝滅劑；
(b)將所述PTO與捕獲和猝滅寡核苷酸(CQO)雜交；其中所述CQO包含(i)捕獲部分，其包含與所述PTO的MTDR反向互補(bǔ)的核苷酸序列，以及(ii)至少一個(gè)猝滅分子；其中所述PTO的所述MTDR被配置為與所述CQO的所述捕獲部分雜交以形成標(biāo)簽雙鏈體；
(c)使所述標(biāo)簽雙鏈體與具有核酸酶活性的酶接觸；其中當(dāng)所述標(biāo)簽雙鏈體與所述靶核酸序列雜交時(shí)，所述具有核酸酶活性的酶誘導(dǎo)所述標(biāo)簽雙鏈體的切割，從而釋放激活的標(biāo)簽雙鏈體片段，所述激活的標(biāo)簽雙鏈體片段包含PTO片段，所述PTO片段包含與所述CQO的所述捕獲部分雜交的所述MTDR和所述至少一個(gè)熒光團(tuán)；
(d)使所述激活的標(biāo)簽雙鏈體片段解鏈和/或雜交以獲得來自所述至少一個(gè)熒光團(tuán)的信號，以及
(e)通過測量來自所述至少一個(gè)熒光團(tuán)的所述信號來檢測所述激活的標(biāo)簽雙鏈體片段；其中所述信號指示所述靶核酸序列的存在。
2.一種用于檢測靶核酸序列的方法，所述方法包括以下步驟：
(a)將探測和標(biāo)記寡核苷酸(PTO)與捕獲和猝滅寡核苷酸(CQO)雜交，其中所述PTO包含(i)包含與所述靶核酸序列基本上互補(bǔ)的核苷酸序列的靶向部分，以及(ii)包含與所述靶核酸序列不互補(bǔ)的核苷酸序列的解鏈溫度決定區(qū)(MTDR)，以及(iii)至少一組相互作用標(biāo)記，包括至少一個(gè)熒光團(tuán)和至少一個(gè)猝滅劑；其中所述CQO包含(i)捕獲部分，其包含與所述PTO的所述MTDR反向互補(bǔ)的核苷酸序列，以及(ii)至少一個(gè)猝滅分子；其中所述PTO的所述MTDR被配置為與所述CQO的所述捕獲部分雜交以形成標(biāo)簽雙鏈體；以及
(b)將所述靶核酸序列與所述標(biāo)簽雙鏈體雜交；
(c)使所述標(biāo)簽雙鏈體與具有核酸酶活性的酶接觸；其中當(dāng)所述標(biāo)簽雙鏈體與所述靶核酸序列雜交時(shí)，所述具有核酸酶活性的酶誘導(dǎo)所述標(biāo)簽雙鏈體的切割，從而釋放激活的標(biāo)簽雙鏈體片段，所述激活的標(biāo)簽雙鏈體片段包含PTO片段，所述PTO片段包含與所述CQO的所述捕獲部分雜交的所述MTDR和所述至少一個(gè)熒光團(tuán)；
(d)使所述激活的標(biāo)簽雙鏈體片段解鏈和/或雜交以獲得來自所述至少一個(gè)熒光團(tuán)的信號，以及
(e)通過測量來自所述至少一個(gè)熒光團(tuán)的所述信號來檢測所述激活的標(biāo)簽雙鏈體片段；其中所述信號指示所述靶核酸序列的存在。
3.一種用于檢測靶核酸序列的方法，所述方法包括以下步驟：
步驟(a)，將靶核酸序列與探測和標(biāo)記寡核苷酸(PTO)雜交；所述PTO包含(i)包含與所述靶核酸序列基本上互補(bǔ)的核苷酸序列的靶向部分，以及(ii)包含與所述靶核酸序列不互補(bǔ)的核苷酸序列的解鏈溫度決定區(qū)(MTDR)，以及(iii)至少一組相互作用標(biāo)記，包括至少一個(gè)熒光團(tuán)和至少一個(gè)猝滅劑；
步驟(b)，使所述雜交的PTO與具有核酸酶活性的酶接觸；其中當(dāng)所述PTO與所述靶核酸序列雜交時(shí)，所述具有核酸酶活性的酶誘導(dǎo)所述PTO的切割，從而釋放激活的PTO片段，所述激活的PTO片段包含所述MTDR和所述至少一個(gè)熒光團(tuán)；
步驟(c)，將所述激活的PTO片段與捕獲和猝滅寡核苷酸(CQO)雜交；其中所述CQO包含(i)捕獲部分，其包含與所述PTO的所述MTDR反向互補(bǔ)的核苷酸序列，以及(ii)至少一個(gè)猝滅分子；其中所述PTO的所述MTDR被配置為與所述CQO的所述捕獲部分雜交以形成激活的標(biāo)簽雙鏈體；
步驟(d)，使所述激活的標(biāo)簽雙鏈體片段解鏈和/或雜交以獲得來自所述至少一個(gè)熒光團(tuán)的信號，以及
步驟(e)，通過測量來自所述至少一個(gè)熒光團(tuán)的信號來檢測所述激活的標(biāo)簽雙鏈體片段；其中所述信號指示所述靶核酸序列的存在。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中重復(fù)所述方法的步驟。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中至少一個(gè)CQO被配置為檢測PTO組。
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