[發(fā)明專利]產(chǎn)生類諾斯卡品的微生物以及其制備和使用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580068542.5
• 申請(qǐng)日: 2015-11-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107002103B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 克里斯蒂娜·D.·斯默克;李嫣然
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 小利蘭.斯坦福大學(xué)托管委員會(huì)
• 主分類號(hào): C12N1/19
• 分類號(hào): C12N1/19
• 代理公司: 北京市君合律師事務(wù)所 11517
• 代理人: 何箏;顧云峰

1.一種工程化的微生物細(xì)胞，所述工程化的微生物細(xì)胞沿著將坎那丁、（S）-N-甲基坎那丁、1-羥基-N-甲基-坎那丁、1,13-二羥基-N-甲基坎那丁、1-羥基-13-O-乙酰基-N-甲基坎那丁或4’-O-去甲基-3-O-乙?；浰趭W辛轉(zhuǎn)化為類諾斯卡品產(chǎn)物的代謝路徑產(chǎn)生作為坎那丁衍生物的芐基異喹啉生物堿產(chǎn)物，所述類諾斯卡品產(chǎn)物為至少一種選自由那可汀半縮醛、諾斯卡品和3-O-乙酰基罌粟奧辛組成的組的化合物，其中在所述工程化的微生物細(xì)胞中產(chǎn)生的所述芐基異喹啉生物堿產(chǎn)物的量大于在微生物細(xì)胞中產(chǎn)生的所述芐基異喹啉生物堿產(chǎn)物的量；

其中所述工程化的微生物細(xì)胞包含編碼參與所述代謝路徑的異二聚體酶的異源編碼序列，所述異二聚體酶為PsMT2+PsMT3的異二聚體酶或PsMT2+Ps6OMT的異二聚體酶。

2.如權(quán)利要求1所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中所述工程化的微生物細(xì)胞將細(xì)胞內(nèi)的起始化合物轉(zhuǎn)化為所述芐基異喹啉生物堿產(chǎn)物。

3.如權(quán)利要求2所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中所述起始化合物是在所述工程化的微生物細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的。

4.如權(quán)利要求1所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中所述芐基異喹啉生物堿產(chǎn)物是苯酞異喹啉生物堿。

5.如權(quán)利要求4所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中所述苯酞異喹啉生物堿產(chǎn)物是罌粟殼堿半縮醛。

6.如權(quán)利要求4所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中所述苯酞異喹啉生物堿產(chǎn)物是那可汀半縮醛。

7.如權(quán)利要求6所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中參與所述代謝路徑的所述酶為PsMT2+PsMT3的異二聚體酶，且其中所述PsMT2+PsMT3的異二聚體酶將罌粟殼堿半縮醛轉(zhuǎn)化為那可汀半縮醛。

8.如權(quán)利要求6所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中參與所述代謝路徑的所述酶為PsMT2+Ps6OMT的異二聚體酶，且其中所述PsMT2+Ps6OMT的異二聚體酶將罌粟殼堿半縮醛轉(zhuǎn)化為那可汀半縮醛。

9.如權(quán)利要求4所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中所述苯酞異喹啉生物堿產(chǎn)物是罌粟殼堿。

10.如權(quán)利要求4所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中所述苯酞異喹啉生物堿產(chǎn)物是諾斯卡品。

11.如權(quán)利要求10所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中參與所述代謝路徑的所述酶為PsMT2+PsMT3的異二聚體酶，且其中所述PsMT2+PsMT3的異二聚體酶將罌粟殼堿轉(zhuǎn)化為諾斯卡品。

12.如權(quán)利要求10所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中參與所述代謝路徑的所述酶為PsMT2+Ps6OMT的異二聚體酶，且其中所述PsMT2+Ps6OMT的異二聚體酶將罌粟殼堿轉(zhuǎn)化為諾斯卡品。

13.如權(quán)利要求1所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中所述芐基異喹啉生物堿產(chǎn)物是原小檗堿產(chǎn)物。

14.如權(quán)利要求1所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中所述芐基異喹啉生物堿產(chǎn)物選自由4’-O-去甲基-3-O-乙?；浰趭W辛和3-O-乙?；浰趭W辛組成的組。

15.如權(quán)利要求13所述的工程化的微生物細(xì)胞，其中所述原小檗堿產(chǎn)物是3-O-乙?；浰趭W辛，其中參與所述代謝路徑的所述酶為PsMT2+PsMT3的異二聚體酶，且其中所述PsMT2+PsMT3的異二聚體酶將4’-O-去甲基-3-O-乙?；浰趭W辛轉(zhuǎn)化為3-O-乙?；浰趭W辛。