[發明專利]鍵形成酶的活性測定

有效

• 申請號: 201580068541.0
• 申請日: 2015-12-14
• 公開（公告）號: CN107109463B
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: M·伯尼茨-杜拉特;E·科佩茨基;P·克拉奇;M·沙特
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 陳迎春;黃革生

1.用于檢測樣品中鍵形成酶的方法，其包括以下步驟：

a)將樣品與包含固定標簽的第一底物和包含可檢測標記的第二底物孵育，由此在樣品中鍵形成酶的存在下，形成包含固定標簽和可檢測標記的綴合物，

b)離心樣品，

c)通過固定標簽將步驟a)的綴合物固定至固相，

d)通過可檢測標記檢測固定的綴合物，

從而檢測樣品中的鍵形成酶。

2.根據權利要求1所述的方法，其中在步驟a)的孵育之后，另外地將樣品稀釋10倍至30倍。

3.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中包含固定標簽的第一底物包含第一鍵形成酶識別基序，并且包含可檢測標記的第二底物包含第二鍵形成酶識別基序。

4.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中第一鍵形成酶識別基序是第一分選酶識別基序，第二鍵形成酶識別基序是第二分選酶識別基序。

5.根據權利要求4所述的方法，其中

1)第一分選酶識別基序包含LPXTG基序(SEQ ID NO：01)，其中X表示任何氨基酸，第二分選酶識別基序包含寡聚甘氨酸或寡聚丙氨酸基序或

2)第二分選酶識別基序包含LPXTG基序(SEQ ID NO：01)，其中X表示任何氨基酸，第一分選酶識別基序包含寡聚甘氨酸或寡聚丙氨酸基序。

6.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中可檢測標記是酶。

7.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中固定標簽是特異性結合對的第一成員，并且固相與特異性結合對的第二成員綴合。

8.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中固定標簽是生物素，并且固相與鏈霉親和素或抗生物素蛋白綴合。

9.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中固相是多孔板。

10.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中固相是珠。

11.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中在步驟a)的孵育之后，用包含碘乙酰胺(IAA)的溶液稀釋樣品。

12.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中樣品在2500×g至7500×g之間離心5分鐘至15分鐘。

13.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中在步驟c)的固定之后，另外地將樣品洗滌至少3次。

14.用于從多種鍵形成酶中選擇鍵形成酶的方法，其通過

a)提供至少兩種鍵形成酶，

b)用所述至少兩種鍵形成酶進行權利要求1的方法，

c)選擇步驟b)中檢測的鍵形成酶。

15.根據權利要求14所述的方法，其中選擇具有最高活性的鍵形成酶。

16.根據權利要求1至2或14中任一項所述的方法，其中所述鍵形成酶是分選酶。