[發(fā)明專利]通過平衡位移測(cè)定結(jié)合常數(shù)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580068478.0
• 申請(qǐng)日: 2015-10-15
• 公開（公告）號(hào): CN107110856B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 亨涅克·波瑞斯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 3B藥品有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/92
• 代理公司: 上海翼勝專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽

1.一種用于確定一物質(zhì)或一物質(zhì)混合物相對(duì)于一溶解目標(biāo)物和一固定化目標(biāo)物的多個(gè)結(jié)合常數(shù)的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

·將所述物質(zhì)或所述物質(zhì)混合物的一第一樣品與固定化于一固體上的一目標(biāo)物進(jìn)行培養(yǎng)，所述固體是一第一樣品容器中的一顆粒載體，所述第一樣品容器含有一緩沖溶液和所述溶解目標(biāo)物；

·將所述物質(zhì)或所述物質(zhì)混合物的一第二樣品與固定化于一固體上的所述目標(biāo)物進(jìn)行培養(yǎng)，所述固體是一第二樣品容器中的一顆粒載體，所述第二樣品容器含有所述緩沖溶液和所述溶解目標(biāo)物；

·將所述物質(zhì)或所述物質(zhì)混合物的一第三樣品與固定化于一固體上的所述目標(biāo)物進(jìn)行培養(yǎng)，所述固體是一第三樣品容器中的一顆粒載體，所述第三樣品容器含有所述緩沖溶液和所述溶解目標(biāo)物；

·將所述物質(zhì)或所述物質(zhì)混合物的一第四樣品與固定化于一固體上的所述目標(biāo)物進(jìn)行培養(yǎng)，所述固體是一第四樣品容器中的一顆粒載體，所述第四樣品容器含有所述緩沖溶液和所述溶解目標(biāo)物；

其中，

包含不同物質(zhì)量的所述固定化目標(biāo)物和相同物質(zhì)量的所述溶解目標(biāo)物的所述物質(zhì)的所述第一樣品和第二樣品被培養(yǎng)，以及包含與所述物質(zhì)的所述第一樣品和第二樣品相同物質(zhì)量的所述固定化目標(biāo)物與包含相同物質(zhì)量的所述溶解目標(biāo)物的所述物質(zhì)的所述第三樣品和第四樣品被培養(yǎng)；

其中所述第三和第四樣品容器中的所述溶解目標(biāo)物的物質(zhì)量與所述第一和第二樣品容器中的所述溶解目標(biāo)物的物質(zhì)量不同；

以及

培養(yǎng)過程中所述第一樣品容器、所述第二樣品容器、所述第三樣品容器和所述第四樣品容器含有相同體積的液相，所述液相由所述緩沖溶液、所述溶解目標(biāo)物和物質(zhì)樣品組成，所述方法更包括以下步驟：

·從各培養(yǎng)基分離出所述固體，所述固體是顆粒載體；

·測(cè)量未與所述固定化目標(biāo)物結(jié)合的所述物質(zhì)或未與所述固定化目標(biāo)物結(jié)合的所述物質(zhì)混合物在各自培養(yǎng)基的上清液中的濃度作為一APA濃度；

·根據(jù)測(cè)定的所述APA濃度，確定所述物質(zhì)或所述物質(zhì)混合物相對(duì)于所述固定化目標(biāo)物的一結(jié)合常數(shù)和所述物質(zhì)或所述物質(zhì)混合物相對(duì)于所述溶解目標(biāo)物的一結(jié)合常數(shù)；

所述多個(gè)結(jié)合常數(shù)是多個(gè)解離常數(shù)，所述多個(gè)解離常數(shù)的測(cè)定如方程式I所述進(jìn)行：

其中，

APA是未與所述固定化目標(biāo)物結(jié)合的所述物質(zhì)的濃度，即游離的物質(zhì)與結(jié)合至所述溶解目標(biāo)物的物質(zhì)；

是所述固定化目標(biāo)物的解離常數(shù)；

是所述溶解目標(biāo)物的解離常數(shù)；

c₀是總恒定添加物質(zhì)濃度；

[immoT]是所述固定化目標(biāo)物的濃度；以及

[P]是所述溶解目標(biāo)物的濃度。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述解離常數(shù)的測(cè)定更包括以下步驟：

·對(duì)及在方程式I中使用一解離常數(shù)矩陣；

·計(jì)算預(yù)期用于所述解離常數(shù)矩陣的各自的APA濃度；

·進(jìn)行比較計(jì)算出的APA濃度與測(cè)定出的APA濃度；

·選擇及的數(shù)值對(duì)，其顯示計(jì)算出的APA濃度和測(cè)定出的APA濃度之間的最小偏差，作為待測(cè)所述物質(zhì)相對(duì)于所述固定化目標(biāo)物或所述溶解目標(biāo)物的多個(gè)指定解離常數(shù)。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：選擇所述及的數(shù)值對(duì)以顯示計(jì)算出的APA濃度與測(cè)定出的APA濃度之間的所述最小偏差是通過一數(shù)值優(yōu)化方法進(jìn)行。

4.如前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：除了所述物質(zhì)的所述第一、第二、第三和第四樣品之外，所述物質(zhì)或所述物質(zhì)混合物的至少一個(gè)另外的樣品與固定化于一固體上的所述目標(biāo)物進(jìn)行培養(yǎng)，所述固體是含有所述緩沖溶液和所述溶解目標(biāo)物的至少一個(gè)另外的樣品容器中的顆粒載體，并在1-21個(gè)含有所述緩沖溶液的樣品容器中進(jìn)行培養(yǎng)；

其中，

含有不同物質(zhì)量的所述固定化目標(biāo)物的多個(gè)另外的樣品被培養(yǎng)；

以及

含有不同物質(zhì)量的所述溶解目標(biāo)物的多個(gè)另外的樣品被培養(yǎng)；

以及

將多個(gè)另外的樣品中的至少一個(gè)在具有相同濃度的所述固定化目標(biāo)物且同時(shí)具有不同濃度的所述溶解目標(biāo)物的兩個(gè)樣品容器中進(jìn)行培養(yǎng)；

以及

所有另外的樣品容器在培養(yǎng)期間含有與所述第一、第二、第三和第四樣品容器相同量的所述緩沖溶液。