[發明專利]用于選擇性消除所關注細胞的方法和組合物

在審

• 申請號: 201580067747.1
• 申請日: 2015-12-14
• 公開（公告）號: CN107249645A
• 公開（公告）日: 2017-10-13
• 發明（設計）人: 朱堅;張怡
• 申請（專利權）人: 朱堅
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;C07K14/47;C12N9/22;C12N9/64;C12N9/78;C12N15/113;C12N15/52;C12N15/85;C12Q1/68;A61P35/00
• 代理公司: 北京市君合律師事務所11517
• 代理人: 顧云峰,吳龍瑛

1.一種選擇性地消除或減少受試者中癌細胞的方法，所述方法包含

a)識別所述受試者中癌細胞的基因組中的靶基因座，所述基因座包含靶多核苷酸序列，其中健康細胞在其基因組中不包含所述靶多核苷酸序列；和

b)向所述受試者施用組合物，所述組合物包含

(i)向導RNA，所述向導RNA能夠與所述靶多核苷酸序列雜交，

(ii)Cas蛋白，和

(iii)自殺基因；

c)在所述癌細胞的基因組中的所述基因座處整合所述自殺基因；和

d)誘導所述癌細胞的細胞死亡。

2.一種組合物，所述組合物包含

a)向導RNA，所述向導RNA能夠與靶細胞的基因組中的靶序列雜交；

b)Cas蛋白；和

c)編碼自殺基因的多核苷酸。

3.權利要求2所述的組合物，其中所述靶序列特定于所述靶細胞。

4.權利要求2所述的組合物，其中所述靶細胞是真核細胞。

5.權利要求2所述的組合物，其中所述靶細胞是癌細胞。

6.權利要求2所述的組合物，其中所述Cas蛋白是Cas9蛋白。

7.權利要求2所述的組合物，其中所述自殺基因選自下組：病毒胸苷激酶、胞嘧啶脫氨酶、針對抗氧化酶的胞內抗體、細菌硝基還原酶、半胱天冬酶和脫氧核糖核酸酶(DNase)。

8.權利要求2所述的組合物，其中所述自殺基因可操作地連接至調控元件。

9.權利要求8所述的組合物，其中所述調控元件是癌特異性啟動子。

10.一種組合物，所述組合物包含一個或多個載體，所述載體包含

a)編碼向導RNA的第一核苷酸序列，所述向導RNA能夠與靶細胞的基因組中的靶序列雜交；

b)編碼Cas蛋白的第二核苷酸序列；和

c)編碼自殺基因的第三核苷酸序列；

其中所述第一、第二和第三核苷酸序列在相同或不同載體中。

11.權利要求10所述的組合物，其中編碼所述Cas蛋白的所述第二核苷酸序列可操作地連接至癌特異性啟動子。

12.一種組合物，所述組合物包含

a)第一向導RNA，所述第一向導RNA能夠與多個靶細胞的基因組中的第一靶序列雜交；

b)第二向導RNA，所述第二向導RNA能夠與所述多個靶細胞的基因組中的第二靶序列雜交；

c)Cas蛋白；和

d)編碼自殺基因的多核苷酸。

13.一種組合物，所述組合物包含一個或多個載體，所述載體包含

a)編碼第一向導RNA的第一核苷酸序列，所述第一向導RNA能夠與多個靶細胞的基因組中的第一靶序列雜交；

b)編碼第二向導RNA的第二核苷酸序列，所述第二向導RNA能夠與所述多個靶細胞的基因組中的第二靶序列雜交；

c)編碼Cas蛋白的第三核苷酸序列；和

d)編碼自殺基因的第四核苷酸序列；

其中所述第一、第二、第三和第四核苷酸序列是在相同或不同載體中。

14.一種細胞，所述細胞包含權利要求2-11任一項所述的組合物。

15.一種方法，所述方法包含權利要求2-11任一項所述的組合物與所述靶細胞接觸。

16.一種方法，所述方法包含權利要求12-13任一項所述的組合物與所述多個靶細胞接觸。

17.一種用于治療受試者癌癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用一個或多個載體，所述載體包含

a)編碼向導RNA的第一核苷酸序列，所述向導RNA能夠與特定于所述癌細胞的基因組的靶序列雜交的；

b)編碼Cas蛋白的第二核苷酸序列；和

c)編碼自殺基因的第三核苷酸序列；

其中所述第一、第二和第三核苷酸序列在相同或不同載體中。

18.權利要求17所述的方法，其中所述靶序列特定于所述癌細胞。

19.權利要求17所述的方法，其進一步包括向所述受試者施用所述自殺基因的前藥。