[發(fā)明專利]針對轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TfR)的RNA適體

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201580067451.X
• 申請日: 2015-10-15
• 公開（公告）號: CN107249644A
• 公開（公告）日: 2017-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: J·J·羅西;S·尹;N·哈比
• 申請（專利權(quán)）人: 希望之城;阿徹納有限公司
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;C07H21/02
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司31266
• 代理人: 馬莉華,陸鳳

相關(guān)申請的交叉引用

本申請要求2014年10月15日提交的美國臨時專利申請?zhí)?2/064,310的優(yōu)先權(quán)，其內(nèi)容出于全部目的通過引用全部納入本文。

對作為ASCII文件提交的“序列表”、表格或計算機程序列表附件的引用

創(chuàng)建于2015年10月14日、編寫在文件48440-551001WO_ST25.TXT中的序列表(1,067字節(jié)，機器格式為IBM-PC，MS-Windows操作系統(tǒng))，在此通過引用引入本文。

發(fā)明背景

轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TfR)是細(xì)胞表面上表達(dá)的膜糖蛋白，并介導(dǎo)細(xì)胞對來自血漿糖蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白的鐵的攝取。從轉(zhuǎn)鐵蛋白攝取鐵涉及轉(zhuǎn)鐵蛋白與TfR的結(jié)合。然后，結(jié)合的轉(zhuǎn)鐵蛋白通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用被內(nèi)吞入內(nèi)吞囊泡中。內(nèi)吞囊泡中pH的降低，導(dǎo)致轉(zhuǎn)鐵蛋白從TfR上被釋放出。TfR在廣泛不同的細(xì)胞中以不同的水平表達(dá)。例如，TfR在未成熟的紅細(xì)胞、胎盤組織和快速分裂的細(xì)胞(包括正常和惡性)中高表達(dá)。因此，某些化合物能與表達(dá)TfR的細(xì)胞表面的TfR結(jié)合并內(nèi)化入細(xì)胞，對于這些化合物的靶向輸送是非常有用的。本發(fā)明提供了針對本領(lǐng)域的這些和其他需求的組合物和方法。

發(fā)明概述

本發(fā)明提供了能夠結(jié)合細(xì)胞上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體并內(nèi)化入細(xì)胞的新型核酸組合物。本發(fā)明提供的核酸組合物，例如可用于將治療劑和成像劑遞送入表達(dá)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的細(xì)胞。

一方面，提供了一能夠結(jié)合細(xì)胞上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體并內(nèi)化入細(xì)胞的核糖核酸化合物。

一方面，提供了一核糖核酸化合物，其包含與SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3有至少80％序列相同性的RNA序列，并且所述RNA序列的長度至少為50個核苷酸。

一方面，提供了一核糖核酸化合物，其包含與SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3有至少80％序列相同性的RNA序列，并且所述RNA序列的長度至少為40個核苷酸。

在另一方面，提供了一藥物制劑，所述藥物制劑包含本發(fā)明所提供的所述核糖核酸化合物(包括其具體實例)和藥學(xué)上可接受的賦形劑。

在另一方面，提供了一藥物制劑，所述藥物制劑包含本發(fā)明所提供的核糖核酸化合物(包括其具體實例)和治療劑。

在另一方面，提供了將化合物部分(moiety)遞送入細(xì)胞的方法，所述方法包括：(i)使細(xì)胞與本發(fā)明所提供的核糖核酸(包括其具體實例)接觸，和(ii)使所述核糖核酸化合物與細(xì)胞上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合并進(jìn)入細(xì)胞，從而將所述化合物部分遞送入細(xì)胞。

在另一方面，提供了將化合物遞送入細(xì)胞的方法，所述方法包括：(i)使細(xì)胞與一化合物和本發(fā)明所提供的核糖核酸化合物(包括其具體實例)接觸，和(ii)使所述核糖核酸化合物與細(xì)胞上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合，并使所述化合物進(jìn)入細(xì)胞，從而將所述化合物遞送入細(xì)胞。

在另一方面，提供了治療癌癥的方法。所述方法包括：向有需要的受試者施用有效量的本發(fā)明所提供的核糖核酸化合物(包括其具體實例)，其中所述核糖核酸化合物還包括抗癌治療部分。

在另一方面，提供了治療癌癥的方法。所述方法包括：向有需要的受試者施用有效量的抗癌劑和本發(fā)明所提供的核糖核酸化合物(包括其具體實例)。

在另一方面，提供了檢測細(xì)胞的方法。所述方法包括：(i)使細(xì)胞與本發(fā)明所提供的核糖核酸化合物(包括其具體實例)接觸，其中所述核糖核酸化合物還包含成像部分，(ii)使得所述核糖核酸化合物與細(xì)胞上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合并進(jìn)入細(xì)胞，和(iii)檢測所述成像部分，從而檢測細(xì)胞。

在另一方面，提供了檢測細(xì)胞的方法。所述方法包括：(i)使細(xì)胞與成像劑和本發(fā)明所提供的核糖核酸化合物(包括其具體實例)接觸，(ii)使得所述核糖核酸化合物與該細(xì)胞上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體結(jié)合，并使該成像劑進(jìn)入該細(xì)胞，和(iii)檢測所述成像劑，從而檢測所述細(xì)胞。

附圖簡述

圖1：適體TR14(SEQ ID NO：1)(左圖)和適體TR18(SEQ ID NO：2)(右圖)的Mfold結(jié)構(gòu)。

圖2：適體TR14的動力學(xué)特征。

圖3：在肝細(xì)胞(HepG2)中，熒光(Cy3)標(biāo)記的對照RNA(左圖)，Cy3標(biāo)記的適體TR14(中圖)和Cy3標(biāo)記的適體TR18(右圖)的細(xì)胞內(nèi)化。使用Hoechst進(jìn)行核染色。