[發明專利]培養容器以及培養容器的制造方法

有效

• 申請號: 201580067308.0
• 申請日: 2015-11-20
• 公開（公告）號: CN107002018B
• 公開（公告）日: 2019-12-03
• 發明（設計）人: 戶谷貴彥;田中鄉史
• 申請（專利權）人: 東洋制罐集團控股株式會社
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00
• 代理公司: 11021 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 葛凡<國際申請>=PCT/JP2015/

本發明可以提供能夠以高于以往的效率使淋巴細胞活化的培養容器及其制造方法。本發明是用于使淋巴細胞活化的由軟包裝材料制成的袋狀的培養容器，在相面對的容器內面的一面以10～300ng/cm²的密度固相化有抗CD3抗體，并且以每1cm²由所述一面構成的培養面中0.25～400ng且0.1～800μl的量封入了溶液狀的抗CD3抗體。另外，在由軟包裝材料制成的袋狀的培養容器中，以所述密度將抗CD3抗體固相化在相面對的容器內面的一面，以所述的量封入溶液狀的抗CD3抗體。

技術領域

本發明涉及一種細胞的培養技術，特別涉及用于使淋巴細胞活化的培養容器及其制造方法。

背景技術

近年來，在醫藥品的生產、基因治療、再生醫療、免疫療法等領域中，要求在人工環境下高效地大量培養細胞或組織、微生物等。

在這樣的狀況下，向由透氣性膜形成的培養容器中封入細胞和培養液，在封閉系統中自動地大量培養細胞。

特別是在培養淋巴細胞的情況下，在用于增加細胞數的培養之前，首先需要使用抗CD3抗體進行用于使淋巴細胞活化的培養。為此，向加入了抗CD3抗體的培養容器中加入淋巴細胞和培養液，進行其活化。

但是，在向培養容器中僅加入了少量的溶液狀的抗CD3抗體的情況下，對淋巴細胞的刺激就會不充分，無法充分地進行活化。另一方面，在向培養容器中大量地加入了溶液狀的抗CD3抗體的情況下，會因細胞的防御機理而使存在于細胞膜中的CD3抗原脫落，淋巴細胞的活化受到阻礙。

以抗CD3抗體作為主成分的免疫抑制劑是著眼于這樣的淋巴細胞的性質而創造的物質，當將其對在內臟器官·組織移植后產生排斥反應的患者施用時，大量的抗CD3抗體與抗原結合而集聚，該集聚物被引入細胞內后向細胞外排出。或者，集聚物由酶切斷，從細胞表面除去抗原。其結果是，刺激不會被傳遞到細胞內，淋巴細胞的活化受到抑制。

如此所述，很難使用游離在溶液中的抗體恰當地控制淋巴細胞的活化，以往，一般廣泛進行的是，將抗CD3抗體固相化在培養容器的底內面，使用這樣的培養容器適度地刺激淋巴細胞，由此將淋巴細胞活化。

另外，在制造淋巴細胞的活化用培養袋(以下有時簡稱為活化培養袋)時，在向培養袋內封入含有抗CD3抗體的抗體溶液而使抗CD3抗體固相化在培養袋內面后，清洗培養袋內而除去游離抗體，其后封入淋巴細胞和培養液而進行活化培養。通過像這樣清洗培養袋內而除去游離抗體，就可以更加有效地進行淋巴細胞的活化。

現有技術文獻

特許文獻1：日本特開2007－175028號公報

發明內容

發明所要解決的問題

因而，本發明人等為了調查在活化培養袋中殘存有抗體溶液時的游離抗體對活化的不良影響，使用各種濃度的抗體溶液，進行了淋巴細胞的活化。

其結果是發現，令人驚奇的是，雖然在抗體濃度是活化培養袋的制造中所用的程度的較高濃度的情況下，淋巴細胞的活化受到抑制，然而在某個一定范圍的低濃度的情況下，淋巴細胞的活化反而得到促進。

即，通過將抗CD3抗體固相化在活化培養袋中，并且封入低濃度的游離抗體，可以促進由活化培養袋造成的淋巴細胞的活化，其結果是，判明可以進一步提高淋巴細胞的增殖效率。

此處，專利文獻1的實施例1中記載，為了制造淋巴細胞的活化培養袋，向培養袋內封入含有抗CD3抗體的抗體溶液而使抗CD3抗體固相化在培養袋內面后，在保持封入抗體溶液不變的狀態下進行活化。另外，在專利文獻1的實施例2中記載，在使抗CD3抗體固相化在培養袋內面后，清洗培養袋內而除去游離抗體，其后封入淋巴細胞和培養液而進行活化。此后，其結果是顯示，在保持封入抗體溶液不變的狀態下進行活化的實施例1與清洗培養袋內而除去游離抗體的實施例2相比，淋巴細胞的增殖效率低。