[發明專利]原始腸內胚層細胞及其制作方法

有效

• 申請號: 201580066955.X
• 申請日: 2015-12-08
• 公開（公告）號: CN107208056B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 武部貴則;谷口英樹;張冉冉
• 申請（專利權）人: 公立大學法人橫濱市立大學
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074;C12N5/10
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 鄭天松

1.原始腸內胚層細胞的制作及擴增方法，其包括：從多能性干細胞、在飼養細胞非存在下、

經如下階段分化：

在第1階段，在Rock抑制物的存在下培養，

在第2階段，在激活素A及Wnt3a的存在下培養，

在第3階段，在BMP4、bFGF、VEGF及激活素A的存在下培養，

在第4階段，在BMP4、bFGF、VEGF及激活素A的存在下培養；

之后實施至少1次以上傳代；

在傳代后的第1階段或傳代初日，在Rock抑制物的存在下培養；及

其后在SFD、5～10ng/ml的FGF2、8～20ng/ml的VEGF、10～40ng/ml的EGF、0.1～1μM的A83-01及1～5μM的Chir99021的存在下培養。

2.通過權利要求1所述的方法得到的原始腸內胚層細胞，其中

作為未分化多能性細胞標志物的NANOG，OCT4，MYC，LIN28A是陰性，

作為內胚層細胞標志物的CXCR4，CER1，HHEX，GATA4是陰性，

作為腸內胚層細胞標志物的CDX2，HOXB9是陽性，

此外，

作為間充質細胞標志物的Brachyury(T)是陰性，

作為胰腺細胞標志物的PDX1是陰性，且

所述細胞至少可分化為肝細胞、胰腺細胞及腸細胞。

3.器官細胞的制作方法，其包括將權利要求2所述的原始腸內胚層細胞向器官細胞分化誘導。

4.將權利要求2所述的原始腸內胚層細胞在任意的階段冷凍－保存并構建用于制造器官細胞的工作細胞庫的方法。