[發明專利]用于測量維生素D的方法

有效

• 申請號: 201580066003.8
• 申請日: 2015-12-04
• 公開（公告）號: CN107003305B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: E.法茨;M.蓋格;H-P.約澤爾;C.福格爾
• 申請（專利權）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號: G01N33/537
• 分類號: G01N33/537;G01N33/541
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權陸軍;黃希貴

1.一種用于沒有24,25-二羥基維生素D₃干擾地確定25-羥基維生素D的濃度的體外方法，其中所述方法用于非診斷目的，且所述方法包括下述步驟：

a)提供得自受試者的樣品，其包含與維生素D-結合蛋白結合的維生素D化合物，

b)將所述樣品與以下結合劑混合

(ba)結合24,25-二羥基維生素D₃的第一結合劑，由此形成所述第一結合劑和24,25-二羥基維生素D₃之間的復合物；

(bb)結合25-羥基維生素D的第二結合劑，由此形成所述第二結合劑和25-羥基維生素D之間的復合物；

c)測量在(bb)中形成的復合物，由此沒有24,25-二羥基維生素D₃干擾地確定25-羥基維生素D的濃度，其中

- 第一結合劑的K_d/第二結合劑的K_d是10或小于10；和/或

- 第一結合劑的濃度/第二結合劑的濃度是至多200；

其中第一結合劑的K_d是所述第一結合劑對24,25-二羥基維生素D₃的親和力，且第二結合劑的K_d是所述第二結合劑對25-羥基維生素D的親和力，和

其中第一結合劑的濃度和第二結合劑的濃度分別是步驟b)中的第一結合劑和第二結合劑的摩爾濃度，其中第一結合劑的濃度是1-1000 nmol/L，和/或第二結合劑的濃度是在1-10 nmol/L的范圍內。

2.根據權利要求1的方法，其中所述樣品是血液、血清或血漿。

3.根據權利要求1和2中的任一項的方法，其中在步驟(b)之前用釋放試劑從維生素D-結合蛋白釋放與維生素D-結合蛋白結合的存在于樣品中的維生素D化合物。

4.根據權利要求1的方法，其中

- 所述第一結合劑關于結合24,25-二羥基維生素D₃的K_d是10^-8 mol/L或小于10^-8 mol/L；和/或

- 所述第二結合劑關于結合25-羥基維生素D的K_d是10^-8 mol/L或小于10^-8 mol/L。

5.根據權利要求1的方法，其中所述方法選自酶聯免疫測定(ELISA)、電化學發光免疫測定(ECLIA)、放射免疫測定(RIA)和化學發光免疫測定(CLIA)。

6.根據權利要求1的方法，其中所述25-羥基維生素D選自25-羥基維生素D₂、25-羥基維生素D₃和3-epi-25-羥基維生素D。

7.根據權利要求1的方法，其中所述第一結合劑是單克隆抗體或所述單克隆抗體的功能活性部分，且所述第二結合劑是維生素D-結合蛋白或所述維生素D-結合蛋白的功能活性部分。

8.根據權利要求1的方法，其中所述第一結合劑具有至少與所述第二結合劑相同的對24,25-二羥基維生素D₃的結合親和力。

9.根據權利要求1的方法，其中所述第二結合劑不能釋放與所述第一結合劑結合的24,25-二羥基維生素D₃。

10.根據權利要求1的方法，其中所述第一結合劑不具有對25-羥基維生素D的顯著交叉反應性。

11.根據權利要求1的方法，其中所述體外檢測方法作為競爭性測定來進行。

12.根據權利要求1-11中的任一項所述的體外方法用于沒有24,25-二羥基維生素D₃干擾地確定25-羥基維生素D的濃度的用途。