[發(fā)明專利]多特異性抗體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580065682.7
• 申請(qǐng)日: 2015-12-01
• 公開（公告）號(hào): CN107001482B
• 公開（公告）日: 2021-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: U·布林克曼;W·舍費(fèi)爾;K·邁爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 豪夫邁·羅氏有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/46
• 分類號(hào): C07K16/46;A61K39/395;A61P35/00;A61P29/00;A61P37/02;A61P19/02;A61P21/00;A61P13/12;A61P19/08
• 代理公司: 北京市中咨律師事務(wù)所 11247
• 代理人: 陳迎春;黃革生

1.一種包含至少三個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的多特異性抗體，其中兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)由第一Fab片段和第二Fab片段形成，其中

a)第三抗原結(jié)合位點(diǎn)由重鏈可變結(jié)構(gòu)域VH₃和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域VL₃形成，其中

-VH₃結(jié)構(gòu)域的N末端與第一Fab片段的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域CH1的C末端或輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域CL借助第一肽接頭連接，并且

-VL₃結(jié)構(gòu)域的N末端與第二Fab片段的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域CH1的C末端或輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域CL借助第二肽接頭連接，

b)多特異性抗體包含兩個(gè)重鏈恒定結(jié)構(gòu)域3，所述重鏈恒定結(jié)構(gòu)域經(jīng)以下方式改變以促進(jìn)異二聚化

i)在CH3結(jié)構(gòu)域之一中通過用具有比原始氨基酸殘基更大的側(cè)鏈體積的氨基酸殘基置換至少一個(gè)原始氨基酸殘基，產(chǎn)生突出部分，并且在另一個(gè)CH3結(jié)構(gòu)域中通過用具有比原始氨基酸殘基更小的側(cè)鏈體積的氨基酸殘基置換至少一個(gè)原始氨基酸殘基，產(chǎn)生空穴，從而在CH3結(jié)構(gòu)域之一中產(chǎn)生的突出部分可布置在另一個(gè)CH3結(jié)構(gòu)域中產(chǎn)生的空穴中；或

將CH3結(jié)構(gòu)域之一中的至少一個(gè)原始氨基酸殘基用帶正電荷的氨基酸置換，并且將另一個(gè)CH3結(jié)構(gòu)域中的至少一個(gè)原始氨基酸殘基用帶負(fù)電荷的氨基酸置換；

ii)在每個(gè)CH3結(jié)構(gòu)域中引入至少一個(gè)半胱氨酸殘基，從而二硫鍵在CH3結(jié)構(gòu)域之間形成，或

iii)i)和ii)的修飾；

c)第三抗原結(jié)合位點(diǎn)的VH₃結(jié)構(gòu)域的C末端與一個(gè)CH3結(jié)構(gòu)域連接，并且第三抗原結(jié)合位點(diǎn)的VL₃結(jié)構(gòu)域的C末端與另一個(gè)CH3結(jié)構(gòu)域連接，并且

d)多特異性抗體缺少重鏈恒定結(jié)構(gòu)域2(CH2)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多特異性抗體，其中通過在以下位置引入半胱氨酸殘基以在VH₃結(jié)構(gòu)域和VL₃結(jié)構(gòu)域之間形成二硫鍵，第三抗原結(jié)合位點(diǎn)受到二硫鍵穩(wěn)定化，其中所述位置根據(jù)Kabat編號(hào)：

-VH₃位置44處，和VL₃位置100處；

-VH₃位置105處，和VL₃位置43處；或

-VH₃位置101處，和VL₃位置100處。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多特異性抗體，其中第一肽接頭和第二肽接頭是至少15個(gè)氨基酸的肽。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多特異性抗體，其中在第一肽接頭和第二肽接頭之間未形成鏈間二硫鍵。

5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的多特異性抗體，其中VH₃結(jié)構(gòu)域的C末端直接與CH3結(jié)構(gòu)域之一連接，并且VL₃結(jié)構(gòu)域的C末端直接與另一個(gè)CH3結(jié)構(gòu)域連接。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的多特異性抗體，其中抗體是三價(jià)的。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的多特異性抗體，其中抗體是雙特異性或三特異性的。

8.復(fù)合物，包含

-根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的多特異性抗體，其中多特異性抗體與半抗原和靶蛋白特異性結(jié)合，和

-半抗原，其由多特異性抗體特異性結(jié)合，其中半抗原與治療藥或診斷藥綴合。

9.用于制備根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的多特異性抗體的方法，包括步驟

-用包含編碼多特異性抗體的核酸的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，

-在允許合成所述多特異性抗體的條件下培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞，并且

-從所述宿主細(xì)胞培養(yǎng)物回收所述多特異性抗體。

10.多特異性抗體，通過根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法產(chǎn)生。

11.核酸，編碼根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的多特異性抗體。