[發(fā)明專利]使用基因修飾的家蠶生產(chǎn)的生物素化和氧化LDL受體和晚期糖化終末產(chǎn)物受體有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201580065415.X | 申請(qǐng)日： | 2015-10-01 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN107404863B | 公開（公告）日： | 2021-04-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 町田幸子;M.倉持;龜山真由美;山本萬理;瀨筒秀樹;立松謙一郎;小堀俊郎 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 國(guó)立研究開發(fā)法人農(nóng)業(yè)·食品產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究機(jī)構(gòu) |
| 主分類號(hào)： | C07K16/18 | 分類號(hào)： | C07K16/18 |
| 代理公司： | 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 梁謀;羅文鋒 |
| 地址： | 日本*** | 國(guó)省代碼： | 暫無信息 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 使用 基因 修飾 家蠶 生產(chǎn) 生物素 氧化 ldl 受體 晚期 糖化 產(chǎn)物 | ||
1.一種制備家蠶的方法，所述家蠶可共表達(dá)地?fù)饺胗芯幋a靶和生物素連接酶的核酸分子，包括注射包含所述核酸的表達(dá)載體。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述生物素連接酶是BirA。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述靶是C型凝集素樣結(jié)構(gòu)域（CTLD）14或晚期糖化終末產(chǎn)物的可溶性受體（sRAGE）或所述CTLD14或sRAGE的變體。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述CTLD14由SEQ ID NO：85編碼，并且所述sRAGE由SEQ IDNO：96編碼。
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中所述家蠶包含待生物素化的標(biāo)簽序列。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述待生物素化的標(biāo)簽序列是GAGTPVTAPLAGTIWKVLASEGQTVAAGEVLLILEAMKMETEIRAAQAGTVRGIAVKAGDAVAVGDTLMTLA和GLNDIFEAQKIEWHE之一。
7.一種制造生物素化的蛋白質(zhì)的方法，其包含：
A）將編碼蛋白質(zhì)和生物素連接酶的核酸分子可共表達(dá)地?fù)饺爰倚Q內(nèi)；
B）將家蠶置于在表達(dá)核酸分子的條件下，以便表達(dá)生物素連接酶和蛋白質(zhì)；和
C）將生物素施用于家蠶，以獲得生物素化的蛋白質(zhì)。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述表達(dá)在家蠶的中部絲腺中執(zhí)行。
9.權(quán)利要求7的方法，其中所述蛋白質(zhì)以生物素化狀態(tài)表達(dá)。
10.權(quán)利要求7的方法，其中步驟A）通過顯微注射包含編碼所述蛋白質(zhì)的核酸的表達(dá)載體來完成。
11.權(quán)利要求7的方法，其中所述蛋白質(zhì)是C型凝集素樣結(jié)構(gòu)域（CTLD）14或晚期糖化終末產(chǎn)物的可溶性受體（sRAGE），或者包含由SEQ ID NO：76至80中的任何一個(gè)所示的氨基酸序列或所述氨基酸序列的變體的單鏈抗體，或者所述單鏈抗體的片段或所述CTLD14、sRAGE或所述單鏈抗體的變體。
12.權(quán)利要求7至11中任一項(xiàng)的方法，其中所述家蠶包含待生物素化的標(biāo)簽序列。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述待生物素化的標(biāo)簽序列是GAGTPVTAPLAGTIWKVLASEGQTVAAGEVLLILEAMKMETEIRAAQAGTVRGIAVKAGDAVAVGDTLMTLA和GLNDIFEAQKIEWHE之一。
14.具有家蠶形式糖鏈的C型凝集素樣結(jié)構(gòu)域（CTLD）14，其包含由SEQ ID NO：86所示的氨基酸序列或其變體，其中所述CTLD14是生物素化的。
15.一種用于檢測(cè)經(jīng)修飾的LDL的組合物，其包含權(quán)利要求14的CTLD14。
16.一種制造C型凝集素樣結(jié)構(gòu)域（CTLD）14的方法，其包括：
A）將編碼CTLD14的核酸分子可表達(dá)地?fù)饺胫良倚Q內(nèi)，其中所述家蠶包含編碼生物素連接酶的核酸序列；
B）將家蠶置于在其中表達(dá)核酸分子的條件下，以便表達(dá)CTLD14；和
C）獲得CTLD14。
17.一種用于檢測(cè)經(jīng)修飾的LDL的試劑盒，其包含權(quán)利要求14的CTLD14，并且進(jìn)一步包含抗LDL雞抗體。
18.一種具有家蠶形式糖鏈的重構(gòu)的晚期糖化終末產(chǎn)物的可溶性受體（sRAGE），其包含由SEQ ID NO：97所示的氨基酸序列或其變體，其中所述sRAGE是生物素化的。
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