[發明專利]分析液滴內容物的方法及相關裝置

有效

• 申請號: 201580063456.5
• 申請日: 2015-10-15
• 公開（公告）號: CN107110854B
• 公開（公告）日: 2019-07-26
• 發明（設計）人: 安德魯·大衛·格里菲思;拉斐爾·克萊門特·李-明·杜諾;克萊門特·尼扎克;菲利普·池-森那·那格;讓·瑪麗·皮埃爾·博德里;埃洛迪·米歇爾·克莉絲汀·布里恩特-利茲勒;阿列克·戈迪納
• 申請（專利權）人: 巴黎高等物理化學工業區
• 主分類號: B01L3/00
• 分類號: B01L3/00;G01N33/543
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 景鵬;姚開麗

本發明涉及一種分析液滴內容物的方法，所述方法包含以下步驟：提供包含于載流體中的多個液滴，至少一個液滴包括顆粒的至少一個聚集體，該聚集體沿主軸線限定延長物體，至少一些液滴包含能夠附著至聚集體的至少一種靶成分。該方法包含測量所述靶成分在聚集體上附著的物理參數特征的步驟。

技術領域

本發明涉及一種分析液滴內容物的方法，所述方法包括以下步驟：

-提供包含于載流體中的多個液滴，至少一個所述液滴包括顆粒的至少一個聚集體，所述聚集體限定沿著主軸線的細長物體，至少一些所述液滴包含能夠附著在聚集體上的至少一種靶成分。

這種方法目的在于例如對分散在液滴中的感興趣的分子進行篩選。具體地，該方法目的在于確定或甚至選擇包括特定靶成分的液滴，該靶成分可能由化學反應或生物反應得到。

具體地，液滴的測量和之后對液滴的選擇可基于產物的濃度或連接活性。

背景技術

文獻WO 2009/011808 A1描述了一種用于測定在液滴中來附著蛋白質的活性的方法。

Mazutis等人于2013年4月4日在“Nature Protocols”雜志上在線發表出版物“Single-cell analysis and sorting using droplet-based microfluidics”闡述了這一原理。

用包被抗小鼠抗體的珠粒將小鼠雜交瘤封裝在滴液中。雜交瘤分泌抗體。與熒光團偶聯的二抗為顯示分泌的抗體的存在提供了可能性。在不存在分泌的抗體的情況下，液滴中二抗的分布是均勻的，但是在存在抗體的情況下二抗重新定位在珠粒上。

因此，該方法對于確定特定細胞的活性是非常有選擇性的。

另一方面，這種方法具有多種缺點。用于使細胞和珠粒區室化的方法是隨機的。可通過泊松分布法估算滴液中的珠粒數。此外，可通過獨立泊松分布法估算滴液中的細胞數。調整珠粒和液滴的初始濃度，以使每個液滴具有平均一個細胞和一個珠粒。因此，對于實現的分析只有液滴的一部分是令人感興趣的。

此外，每個液滴存在的顯著尺寸的單個珠粒不利于該方法的分辨率。實際上，二抗分布在珠粒的整個表面上。因此，該方法的動態范圍受限于每個珠粒可用的外表面積。

發明內容

本發明的目的是提供比現有方法更可靠和更靈敏的分析方法。

為此，本發明的目的是提供一種上述類型的方法，其特征在于，所述方法包括測量步驟，所述測量步驟用于測量靶成分在聚集體上附著的物理參數特征。

根據本發明的方法可包括以下特征中的一個或幾個，這些特征單獨使用或根據技術上所有可能的組合來使用：

-顆粒是磁性顆粒，有利地是順磁性顆粒，優選超順磁性顆粒；

-提供液滴的步驟包括：

-將顆粒分散在流體質量中，用于形成液滴，然后

-以液滴形式分散所述流體質量，

-在每一液滴中形成至少一個顆粒的聚集體，所述聚集體限定沿主軸線的細長物體，分散后，顆粒的聚集體形成于每一液滴中；

-靶成分是選自由蛋白質、抗體、肽、DNA或RNA片段、代謝物、離子、脂質和能由細胞產生的生物分子形成的組的成分；

-至少一些液滴包括能產生靶成分的生產實體，生產實體優選選自由細胞或體外表達系統構成的組；

-所述測量步驟包括在位于所述液滴中的多個點中局部測量所述物理參數，所述測量步驟優選包括確定所述液滴內測量的值的積分；

-該方法包括在測量步驟之前，沿檢測軸線定向聚集體的主軸線的步驟；