[發明專利]用于進行甲基化檢測測定的組合物和方法

有效

• 申請號: 201580062917.7
• 申請日: 2015-12-11
• 公開（公告）號: CN107003314B
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發明（設計）人: H.T.阿拉維;G.P.利德加德
• 申請（專利權）人: 精密科學公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝

1.一種表征血液或血液制品的方法，其包括：

a)由受試者提供血液或血液制品樣品；

b)測定所述樣品以檢測上皮細胞特異性DNA的存在；

其中所述上皮細胞特異性DNA的存在指示所述血液或血液制品樣品中上皮細胞的存在，

其中所述上皮細胞特異性DNA是甲基化的ZDHHC1 DNA，所述方法包括：

i)用亞硫酸氫鹽試劑處理來自所述血液或血液制品樣品的DNA以產生亞硫酸氫鹽轉化的ZDHHC1 DNA；

ii)使用與SEQ ID NO:27和其互補序列互補的引物對擴增所述亞硫酸氫鹽轉化的ZDHHC1 DNA的區；

其中所述區的擴增指示所述血液或血液制品樣品中的上皮細胞特異性DNA的存在。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述引物對選自具有選自SEQ ID NO:29、30和32的序列的引物。

3.如權利要求1所述的方法，其中所述血液制品是血漿。

4.如權利要求1所述的方法，其中所述測定包括使用聚合酶鏈式反應、核酸測序、質譜法、甲基化特異性核酸酶、基于質量的分離或DNA靶捕獲。

5.如權利要求1所述的方法，其中所述測定是側翼內切核酸酶測定。

6.一種進行定量核酸檢測測定的方法，其包括：

a)測定來自受試者的樣品的至少一種標記基因的量，其中所述樣品選自糞便樣品和組織樣品；

b)測定所述樣品的ZDHHC1 DNA的量；

其中測定所述樣品包括：

i)用亞硫酸氫鹽試劑處理來自所述樣品的DNA以產生至少一種亞硫酸氫鹽轉化的標記基因和亞硫酸氫鹽轉化的ZDHHC1 DNA；

ii)擴增所述亞硫酸氫鹽轉化的標記基因的區；以及

iii)使用與SEQ ID NO:27和其互補序列互補的引物對擴增所述亞硫酸氫鹽轉化的ZDHHC1 DNA的區；

以及

c)將所述樣品中的所述至少一種標記基因的量與所述ZDHHC1DNA的量進行比較，以確定所述樣品中相對于所述ZDHHC1 DNA的量的所述至少一種標記基因的量。

7.如權利要求6所述的方法，其中所述測定包括使用聚合酶鏈式反應、核酸測序、質譜法、甲基化特異性核酸酶、基于質量的分離和/或靶捕獲。

8.如權利要求6所述的方法，其中測定所述樣品的所述標記基因的量和所述ZDHHC1DNA的量在單個反應中進行。

9.如權利要求6所述的方法，其中所述測定是側翼內切核酸酶測定。

10.如權利要求6所述的方法，其中相對于轉化的ZDHHC1 DNA的量的轉化的標記基因的量指示所述標記基因的甲基化狀態，其中所述甲基化狀態包括相對于所述標記基因的正常甲基化狀態的所述標記基因的增加或減少的甲基化。