[發明專利]融合蛋白、重組細菌和使用重組細菌的方法

在審

• 申請號: 201580061231.6
• 申請日: 2015-09-17
• 公開（公告）號: CN107208042A
• 公開（公告）日: 2017-09-26
• 發明（設計）人: B·湯普森;A·西格爾
• 申請（專利權）人: 斯波根生物技術公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C07K19/00;C12N15/75;C12P21/02;A01N37/44;A01N63/02;A23K20/147;C09K8/62;C12N3/00;C12R1/085
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所11247
• 代理人: 柴云峰,黃革生

1.表達融合蛋白的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，所述融合蛋白包含：至少一種目標蛋白或肽；以及使所述融合蛋白靶向所述重組蠟樣芽胞桿菌家族成員的外孢壁的靶向序列、外孢壁蛋白或外孢壁蛋白片段；其中所述重組蠟樣芽胞桿菌家族成員包含突變或表達蛋白，其中相比于在相同條件下在野生型蠟樣芽胞桿菌家族成員中蛋白的表達，所述蛋白的表達增強，并且其中所述蛋白的突變或增強的表達導致具有這樣外孢壁的蠟樣芽胞桿菌孢子，該外孢壁相比于野生型孢子的外孢壁更容易從所述孢子除去。

2.表達融合蛋白的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，所述融合蛋白包含：至少一種目標蛋白或肽；以及使所述融合蛋白靶向所述重組蠟樣芽胞桿菌家族成員的外孢壁的靶向序列、外孢壁蛋白或外孢壁蛋白片段；其中所述重組蠟樣芽胞桿菌家族成員：

(i)包含CotE基因中的突變；

(ii)表達ExsY蛋白，其中相比于在相同條件下在野生型蠟樣芽胞桿菌家族成員中ExsY蛋白的表達，ExsY蛋白的表達增強，并且其中所述ExsY蛋白包含含有球狀蛋白的羧基端標簽；

(iii)表達BclB蛋白，其中相比于在相同條件下在野生型蠟樣芽胞桿菌家族成員中BclB蛋白的表達，BclB蛋白的表達增強；

(iv)表達YjcB蛋白，其中在相同條件下在野生型蠟樣芽胞桿菌家族成員中相比于YjcB蛋白的表達，YjcB蛋白的表達增強；

(v)包含ExsY基因中的突變；

(vi)包含CotY基因中的突變；

(vii)包含ExsA基因中的突變；或

(viii)包含CotO基因中的突變。

3.權利要求1或2所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中所述重組蠟樣芽胞桿菌家族成員包括CotE基因中的突變。

4.權利要求3所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中CotE基因中的突變包含CotE基因或CotE基因的顯性陰性形式的敲除。

5.權利要求1-4中任一項所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中所述重組蠟樣芽胞桿菌家族成員表達ExsY蛋白，其中在相同條件下在野生型蠟樣芽胞桿菌家族成員中相比于ExsY蛋白的表達，ExsY蛋白的表達增強，并且其中所述ExsY蛋白包含含有球狀蛋白的羧基端標簽。

6.權利要求5所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中所述球狀蛋白的分子量為25kDa至100kDa。

7.權利要求5或6所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中所述球狀蛋白包含綠色熒光蛋白(GFP)或其變體。

8.權利要求1-7中任一項所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中所述重組蠟樣芽胞桿菌家族成員表達BclB蛋白，其中在相同條件下在野生型蠟樣芽胞桿菌家族成員中相比于BclB蛋白的表達，BclB蛋白的表達增強。

9.權利要求1-8中任一項所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中所述重組蠟樣芽胞桿菌家族成員表達YjcB蛋白，其中在相同條件下在野生型蠟樣芽胞桿菌家族成員中相比于YjcB蛋白的表達，YjcB蛋白的表達增強。

10.權利要求1-9中任一項所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中所述重組蠟樣芽胞桿菌家族成員包含ExsY基因中的突變。

11.權利要求10所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中ExsY基因中的突變包括ExsY基因的敲除。

12.權利要求1-11中任一項所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中所述重組蠟樣芽胞桿菌家族成員包含CotY基因中的突變。

13.權利要求12所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中CotY基因中的突變包括CotY基因的敲除。

14.權利要求1-13中任一項所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中所述重組蠟樣芽胞桿菌家族成員包含ExsA基因中的突變。

15.權利要求14所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中ExsA基因中的突變包括ExsA基因的敲除。

16.權利要求1-15中任一項所述的重組蠟樣芽胞桿菌家族成員，其中所述重組蠟樣芽胞桿菌家族成員包含CotO基因中的突變。