[發明專利]一種可溶的異質二聚T細胞受體及其制法和應用

有效

• 申請號: 201580060677.7
• 申請日: 2015-11-04
• 公開（公告）號: CN107223133B
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 李懿;樊輝
• 申請（專利權）人: 廣東香雪精準醫療技術有限公司
• 主分類號: C07K14/725
• 分類號: C07K14/725;C12N15/12;C12N15/63;C12N1/21;A61K38/17;A61P35/00;A61P31/12;A61P37/02
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 陳詳;劉妍珺

1.一種T細胞受體(TCR)，其特征在于，在所述TCR的α鏈和β鏈的恒定區中引入半胱氨酸殘基以形成人工鏈間二硫鍵，并且所述TCR的Tm值≥45℃；

并且，形成人工鏈間二硫鍵的半胱氨酸殘基替換了：

TRAC*01外顯子1的53R與TRBC1*01外顯子1的54S，或TRAC*01外顯子1的53R與TRBC2*01外顯子1的54S；或

TRAC*01外顯子1的10Y與TRBC1*01外顯子1的20E，或TRAC*01外顯子1的10Y與TRBC2*01外顯子1的20E；

并且，所述的TCR為人TCR。

2.如權利要求1所述的TCR，其特征在于，所述TCR包含(ⅰ)除其跨膜結構域以外的全部或部分TCRα鏈，和(ⅱ)除其跨膜結構域以外的全部或部分TCRβ鏈，其中(ⅰ)和(ⅱ)均包含TCR鏈的功能性可變結構域和至少一部分恒定結構域，所述恒定結構域包含權利要求1中的所述位置的半胱氨酸殘基的替換以形成人工鏈間二硫鍵。

3.如權利要求1所述的TCR，其特征在于，所述TCR是可溶的。

4.如權利要求1所述的TCR，其特征在于，所述TCR中不存在天然鏈間二硫鍵。

5.如權利要求4所述的TCR，其特征在于，所述TCR中將天然TCR的C末端截短以去除形成所述天然鏈間二硫鍵的半胱氨酸殘基。

6.如權利要求4所述的TCR，其特征在于，所述TCR中形成所述天然鏈間二硫鍵的半胱氨酸殘基被替換為另一殘基。

7.如權利要求1所述的TCR，其特征在于，所述TCR的β鏈恒定區中不存在未配對的半胱氨酸殘基。

8.如權利要求7所述的TCR，其特征在于，所述TCRβ鏈恒定區中未配對的半胱氨酸殘基被替換為丙氨酸或絲氨酸。

9.如權利要求1所述的TCR，其特征在于，所述TCR的α鏈和/或β鏈的C-或N-末端結合有偶聯物。

10.如權利要求9所述的TCR，其特征在于，與所述TCR結合的偶聯物為可檢測標記物、治療劑、PK修飾部分或其組合。

11.如權利要求10所述的TCR，其特征在于，與所述TCR結合的治療劑為連接于所述TCR的α或β鏈的C-或N-末端的抗-CD3抗體。

12.一種核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含編碼權利要求1-11中任一所述的TCR的α鏈和β鏈的核酸序列。

13.一種載體，所述的載體含有權利要求12所述的核酸分子。

14.一種宿主細胞，所述的細胞含有權利要求13所述的載體或染色體中整合有外源的權利要求12所述的核酸分子，并且，所述的宿主細胞選自大腸桿菌、酵母細胞和CHO細胞。

15.一種分離的細胞，其特征在于，其呈遞權利要求1所述的TCR，并且，所述的細胞為T細胞。

16.一種制備權利要求1所述的TCR的方法，包括步驟：

(i)培養權利要求14所述的宿主細胞，從而表達權利要求1所述的TCR的α鏈和β鏈；

(ii)分離或純化出所述的α鏈和β鏈；

(iii)重折疊所述的α鏈和β鏈，獲得所述TCR。

17.一種T細胞受體復合物，其特征在于，所述的復合物含有一個或多個權利要求1-11中任一所述的TCR。