[發明專利]芽孢桿菌屬物種的絲氨酸蛋白酶

在審

• 申請號: 201580058592.5
• 申請日: 2015-10-27
• 公開（公告）號: CN107148472A
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發明（設計）人: M·科爾克曼;A·H·凱利特-史密斯;R·梅耶達爾;L·M·巴別
• 申請（專利權）人: 丹尼斯科美國公司
• 主分類號: C12N9/54
• 分類號: C12N9/54;C12N15/57;C11D3/386
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所11247
• 代理人: 胡志君,黃革生

本公開涉及從芽孢桿菌屬的物種(Bacillus spp.)克隆的絲氨酸蛋白酶及其變體。含有絲氨酸蛋白酶的組合物適合用于清潔織物和硬表面，以及用于各種工業應用。

絲氨酸蛋白酶是具有啟動蛋白質肽鍵水解的活性位點絲氨酸的酶(EC編號3.4.21)。基于它們的結構，存在兩大類絲氨酸蛋白酶：胰凝乳蛋白酶樣(胰蛋白酶樣)和枯草桿菌蛋白酶樣。原型枯草桿菌蛋白酶(EC編號3.4.21.62)最初從枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)獲得。枯草桿菌蛋白酶及其同源物是MEROPS分類方案的S8肽酶家族的成員。家族S8的成員在其氨基酸序列中具有順序為Asp、His和Ser的催化三聯體。

盡管在工業酶領域很久以來就已經知道絲氨酸蛋白酶，但是仍然需要適合于特定條件和用途的另外的絲氨酸蛋白酶。

本發明的組合物和方法涉及從芽孢桿菌屬的物種克隆的重組絲氨酸蛋白酶及其變體。含有絲氨酸蛋白酶的組合物適合用于清潔織物和硬表面，以及用于各種工業應用。

在一些實施例中，本發明是枯草桿菌蛋白酶的BspE04637進化枝。在一些實施例中，本發明是BspE04637進化枝枯草桿菌蛋白酶的重組多肽或其活性片段。在一些實施例中，枯草桿菌蛋白酶的BspE04637進化枝包括含有DTGI XXXHXDLXXXGGXSVFXXXXXXXXXXDXXGH(SEQ ID NO:31)基序的枯草桿菌蛋白酶或重組多肽或其活性片段，其中初始D是活性位點天冬氨酸，末端H是活性位點組氨酸，并且X是任何氨基酸(“基序1”)。在其他實施例中，枯草桿菌蛋白酶的BspE04637進化枝包括含有DTGIXXXHXDL XXXGGXSVFXXXXXXDPXXDXXGH(SEQ ID NO:32)基序的枯草桿菌蛋白酶或重組多肽或其活性片段，其中初始D是活性位點天冬氨酸，末端H是活性位點組氨酸，并且X是任何氨基酸(“基序2”)。在又進一步的實施例中，枯草桿菌蛋白酶的BspE04637進化枝包括含有DTGIXXXHXDL NVXGGXSVFXXXXXXXXXXDXXGH(SEQ ID NO:33)基序的枯草桿菌蛋白酶或重組多肽或其活性片段，其中初始D是活性位點天冬氨酸，末端H是活性位點組氨酸，并且X是任何氨基酸(“基序3”)。在又另一個實施例中，枯草桿菌蛋白酶的BspE04637進化枝包括含有DTGIXXXHXDL NVXGGXSVFXXXXXXDPXXDXXGH(SEQ ID NO:34)基序的枯草桿菌蛋白酶或重組多肽或其活性片段，其中初始D是活性位點天冬氨酸，末端H是活性位點組氨酸，并且X是任何氨基酸(“基序4”)。在一些實施例中，枯草桿菌蛋白酶的BspE04637進化枝包括含有DTGIDXXHXDLNVXGGXS VFXXXXXXXXXXDXXGH(SEQ ID NO:35)基序的枯草桿菌蛋白酶或重組多肽或其活性片段，其中初始D是活性位點天冬氨酸且末端H是活性位點組氨酸，并且X是任何氨基酸(“基序5”)。在一些實施例中，枯草桿菌蛋白酶的BspE04637進化枝包括含有DTGIDXNHXDL NVRGGXSVFTXXXXX DPXXDXXGH(SEQ ID NO:36)基序的枯草桿菌蛋白酶或重組多肽或其活性片段，其中初始D是活性位點天冬氨酸，末端H是活性位點組氨酸，并且X是任何氨基酸(“基序6”)。在一些實施例中，枯草桿菌蛋白酶的BspE04637進化枝包括含有DTGIDXNHXDLNVRGGXSVFTXXXXX DPYYDXXGH(SEQ ID NO:37)基序的枯草桿菌蛋白酶或重組多肽或其活性片段，其中初始D是活性位點天冬氨酸且末端H是活性位點組氨酸，并且X是任何氨基酸(“基序7”)。

在一些實施例中，本發明是包含與SEQ ID NO:3、6或9的氨基酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列的重組多肽或其活性片段。在一些實施例中，重組多肽或其活性片段包含與SEQ ID NO:3、6或9的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些實施例中，重組多肽或其活性片段包含與SEQ ID NO:3、6或9的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，條件是所述多肽或其活性片段不包括BAD02409或JP2003325186-0001。