[發(fā)明專利]用于穩(wěn)定反式剪接的內(nèi)含肽修飾的蛋白酶的方法和組合物有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201580058516.4 | 申請日： | 2015-10-28 |
| 公開（公告）號： | CN107075491B | 公開（公告）日： | 2021-07-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | M·R·萊布;B·沈;G·拉扎爾 | 申請（專利權(quán)）人： | 谷萬達公司 |
| 主分類號： | C12N9/50 | 分類號： | C12N9/50;C12N9/54;C12N15/62;C11D3/386 |
| 代理公司： | 北京潤平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11283 | 代理人： | 劉依云;嚴政 |
| 地址： | 美國馬*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 穩(wěn)定 反式 剪接 內(nèi)含 修飾 蛋白酶 方法 組合 | ||
1.一種內(nèi)含肽修飾的蛋白酶，該內(nèi)含肽修飾的蛋白酶包括：第一前體和第二前體：所述第一前體包括與反式剪接的內(nèi)含肽的可溶性增強的N-內(nèi)含肽融合的靶蛋白酶的N-外顯肽，且N-外顯肽的羧基末端與可溶性增強的N-內(nèi)含肽的氨基末端融合；所述第二前體包括與靶蛋白酶的C-外顯肽融合的反式剪接的內(nèi)含肽的可溶性增強的C-內(nèi)含肽，且可溶性增強的C-內(nèi)含肽的羧基末端與C-外顯肽的氨基末端融合；且在反式剪接之前所述第一前體與所述第二前體是分離的；其中，所述第一前體的氨基酸序列為SEQ ID NO：1所示，且所述第二前體的氨基酸序列為SEQ ID NO：2所示，所述內(nèi)含肽修飾的蛋白酶與所述靶蛋白酶相比具有增強的可溶性和降低的活性，且經(jīng)所述內(nèi)含肽修飾的蛋白酶的反式剪接以及N-外顯肽與C-外顯肽的融合，所述靶蛋白酶的活性恢復(fù)。
2.一種表達盒，該表達盒包括編碼內(nèi)含肽修飾的蛋白酶的第一前體或第二前體的多核苷酸，
其中，所述第一前體包括與反式剪接的內(nèi)含肽的可溶性增強的N-內(nèi)含肽融合的靶蛋白酶的N-外顯肽，且N-外顯肽的羧基末端與可溶性增強的N-內(nèi)含肽的氨基末端融合；所述第二前體包括與靶蛋白酶的C-外顯肽融合的反式剪接的內(nèi)含肽的可溶性增強的C-內(nèi)含肽，且可溶性增強的C-內(nèi)含肽的羧基末端與C-外顯肽的氨基末端融合；并且
其中，所述多核苷酸的序列為SEQ ID NO：3或4所示，經(jīng)所述表達盒的表達，在反式剪接之前所述第一前體與所述第二前體將是分離的，內(nèi)含肽修飾的蛋白酶與靶蛋白酶相比將具有增強的可溶性和降低的活性，且經(jīng)內(nèi)含肽修飾的蛋白酶的反式剪接以及N-外顯肽與C-外顯肽的融合，靶蛋白酶的活性將恢復(fù)。
3.一種組合物，該組合物含有：內(nèi)含肽修飾的蛋白酶的第一前體和內(nèi)含肽修飾的蛋白酶的第二前體，所述第一前體包括與反式剪接的內(nèi)含肽的可溶性增強的N-內(nèi)含肽融合的靶蛋白酶的N-外顯肽，且N-外顯肽的羧基末端與可溶性增強的N-內(nèi)含肽的氨基末端融合；所述第二前體包括與靶蛋白酶的C-外顯肽融合的反式剪接的內(nèi)含肽的可溶性增強的C-內(nèi)含肽，且可溶性增強的C-內(nèi)含肽的羧基末端與C-外顯肽的氨基末端融合；且在反式剪接之前所述第一前體與所述第二前體是分離的；其中，所述第一前體的氨基酸序列為SEQ ID NO：1所示，且所述第二前體的氨基酸序列為SEQ ID NO：2所示，內(nèi)含肽修飾的蛋白酶與靶蛋白酶相比具有增強的可溶性和降低的活性，且經(jīng)內(nèi)含肽修飾的蛋白酶的反式剪接以及N-外顯肽與C-外顯肽的融合，靶蛋白酶獲得活性。
4.一種家庭護理產(chǎn)品，該家庭護理產(chǎn)品含有權(quán)利要求1所述的內(nèi)含肽修飾的蛋白酶、或權(quán)利要求3所述的組合物、以及選自由：鈉鹽補充劑、鉀鹽補充劑、銨鹽補充劑、帶電聚合鹽補充劑、多元醇補充劑、檸檬酸鋰和乙氧基化醇醚組成的組中的一種或多種效應(yīng)物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的家庭護理產(chǎn)品，其中，所述一種或多種效應(yīng)物能夠抑制反式剪接。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的家庭護理產(chǎn)品，其中，所述抑制是可逆的。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的家庭護理產(chǎn)品，其中，所述鈉鹽補充劑選自由：氯化鈉、亞氨基二琥珀酸四鈉、琥珀酸二鈉、酒石酸二鈉、煙酸鈉和聚天冬氨酸鈉組成的組。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的家庭護理產(chǎn)品，其中，所述鉀鹽補充劑選自由：乳酸鉀、檸檬酸鉀和氯化鉀組成的組。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的家庭護理產(chǎn)品，其中，所述銨鹽補充劑選自由：硫酸銨和硝酸銨組成的組。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的家庭護理產(chǎn)品，其中，所述多元醇補充劑選自由：四乙二醇、聚乙二醇、四甘醇、碳酸丙烯酯、單丙二醇和甘油組成的組。
11.根據(jù)權(quán)利要求4所述的家庭護理產(chǎn)品，其中，所述家庭護理產(chǎn)品進一步含有洗滌劑。
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