[發明專利]細胞分離方法及細胞捕獲過濾器在審

申請號：	201580058481.4	申請日：	2015-10-29
公開（公告）號：	CN107075447A	公開（公告）日：	2017-08-18
發明（設計）人：	吉野知子;田中剛;松永是;根岸諒;上原壽茂;中村清太	申請（專利權）人：	國立大學法人東京農工大學;日立化成株式會社
主分類號：	C12N1/02	分類號：	C12N1/02;C12M1/12;C12M3/06;C12M1/00
代理公司：	永新專利商標代理有限公司72002	代理人：	王靈菇,白麗
地址：	日本***	國省代碼：	暫無信息
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摘要：
搜索關鍵詞：	細胞分離方法捕獲過濾器
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及細胞分離方法及該細胞分離方法中使用的細胞捕獲過濾器。

背景技術

癌由于在世界各國中占據死因的上位，因此期待癌的早期發現及治療。因癌導致的人的死亡基本都是因為癌的復發轉移。癌的復發轉移是由于癌細胞從原發灶經由血管或淋巴管錨定、浸潤到其他臟器組織的血管壁上、形成微小轉移灶而引起的。將這種通過血管或淋巴管的在人體內循環的癌細胞稱作血中循環癌細胞(Circulating Tumor Cell，以下根據情況稱作“CTC”)。

若能夠對可能引起癌轉移復發的血管中的癌細胞(CTC)的有無及其量進行測定，則能夠對癌治療有很大的貢獻。作為捕獲血液中的癌細胞的現有技術，例如已知專利文獻1中記載的構成。專利文獻1記載的技術利用過濾器將血液中的癌細胞捕獲，其中給出了使用了過濾器的半導體技術的制造方法、收納有過濾器的cell unit的形狀及流過血液和處理液的流路的結構。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：美國專利申請公開第2011/0053152號說明書

發明內容

發明要解決的技術問題

但是，近年來，從更為準確地把握血管中的癌細胞狀況的目的出發，有期望對癌細胞的個體分別進行觀察的要求。但是，即便是例如使用專利文獻1記載的技術將癌細胞捕獲到過濾器上，也難以對癌細胞個體進行觀察。另外，由于過濾器上的癌細胞易于彈性變形，因此處理困難，而若使其損傷，則無法適當地進行細胞的觀察。

本發明鑒于上述事實而完成，其目的在于提供能夠在不使細胞捕獲過濾器上所捕獲的癌細胞損傷的情況下進行分離的細胞分離方法及該細胞分離方法中使用的細胞捕獲過濾器。

用于解決技術問題的方法

為了達成上述目的，本發明一個方式的細胞分離方法的特征在于包含以下步驟：使受檢液通過在厚度方向具有多個貫通孔的細胞捕獲過濾器，將所述受檢液所含的作為分離對象的細胞捕獲到細胞捕獲過濾器的一個面上的細胞捕獲步驟；將刺激響應性水凝膠導入至在所述細胞捕獲步驟中捕獲了所述細胞的所述細胞捕獲過濾器的一個面上，利用該刺激響應性水凝膠將所述細胞包埋的凝膠包埋步驟；通過對包埋了所述細胞的所述刺激響應性水凝膠賦予刺激，使該刺激響應性水凝膠固化的凝膠固化步驟；和將在所述凝膠固化步驟中固化的所述刺激響應性水凝膠從所述細胞捕獲過濾器上剝離的剝離步驟。

上述細胞分離方法中，將刺激響應性水凝膠導入至在細胞捕獲步驟中捕獲了細胞的細胞捕獲過濾器2的一個面上，在利用該刺激響應性水凝膠將細胞包埋之后，通過對刺激響應性水凝膠賦予刺激，使該刺激響應性水凝膠固化，將固化的刺激響應性水凝膠從細胞捕獲過濾器上剝離。如此，通過使用刺激響應性水凝膠對細胞進行分離，以細胞被刺激響應性水凝膠包埋的狀態對細胞進行操作，因此與對分離對象的細胞進行直接操作的情況相比，處理性提高，能夠在不損害細胞的情況下進行分離。

這里，可以是在所述凝膠固化步驟中、僅使包埋了所述細胞的所述刺激響應性水凝膠中的分離對象的所述細胞周圍局部地固化的方式。

如此，在凝膠固化步驟中，當為僅使分離對象的所述細胞周圍局部地固化的構成時，由于能夠分別對每個細胞操作經固化的水凝膠，因此處理性進一步提高。

另外，本發明一個方式的細胞捕獲過濾器是上述細胞分離方法中使用的細胞捕獲過濾器，其特征在于，所述一個面側中相鄰的所述貫通孔間的距離為80μm以上。

上述細胞分離方法中使用的細胞捕獲過濾器2通過為在一個面側中相鄰的貫通孔間的距離為80μm以上的構成，能夠防止被相鄰的貫通孔捕獲的細胞被水凝膠暫時地固化，因此能夠適當地進行細胞的分離。

發明效果

根據本發明，提供能夠在不損害細胞捕獲過濾器上所捕獲的細胞的情況下進行分離的細胞分離方法及該細胞分離方法中使用的細胞捕獲過濾器。

附圖說明

圖1為細胞捕獲器件的概略構成圖。

圖2為細胞捕獲器件的分解立體圖。

圖3為對細胞捕獲過濾器進行說明的圖。

圖4為對細胞捕獲過濾器進行說明的圖。

圖5為對細胞分離方法進行說明的圖。