[發(fā)明專利]脫氫酶活性提高的阿馬多里酶在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201580057464.9 | 申請日： | 2015-10-23 |
| 公開（公告）號： | CN107148475A | 公開（公告）日： | 2017-09-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 鉞陽介;小松﨑愛里;一柳敦 | 申請（專利權(quán)）人： | 龜甲萬株式會社 |
| 主分類號： | C12N15/09 | 分類號： | C12N15/09;C12M1/40;C12N9/06;C12N9/08;C12Q1/26;G01N27/327;G01N27/416 |
| 代理公司： | 北京安信方達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11262 | 代理人： | 李平,鄭霞 |
| 地址： | 日本*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 脫氫酶 活性 提高 阿馬多里酶 | ||
1.一種阿馬多里酶，其為氧化酶活性相對于脫氫酶活性的比率(OX/DH)與修飾前的阿馬多里酶相比發(fā)生降低的修飾阿馬多里酶，所述修飾阿馬多里酶為如下的阿馬多里酶：
(i)在將阿馬多里酶的氨基酸序列與序列號1中記載的氨基酸序列進(jìn)行比對時，序列號1所示的氨基酸序列中選自由280位、267位、269位、54位和241位構(gòu)成的組的位置所對應(yīng)位置的1個以上的氨基酸被取代，且具有脫氫酶活性的阿馬多里酶；
(ii)所述(i)的阿馬多里酶中，序列號1所示的氨基酸序列中280位、267位、269位、54位和241位所對應(yīng)位置以外的位置的1個或更多個氨基酸由被取代、缺失或添加的氨基酸序列組成，且具有脫氫酶活性的阿馬多里酶；
(iii)所述(i)的阿馬多里酶中，該阿馬多里酶的全長氨基酸序列與序列號1、序列號3、序列號6、序列號9、序列號10、序列號11、序列號44、序列號53或序列號67的氨基酸序列有70％以上的序列同源性，由序列號1的第10位～32位、36～41位、49～52位、54～58位、63～65位、73～75位、84～86位、88～90位、120～122位、145～150位、156～162位、164～170位、180～182位、202～205位、207～211位、214～224位、227～230位、236～241位、243～248位、258～261位、266～268位、270～273位、275～287位、295～297位、306～308位、310～316位、324～329位、332～334位、341～344位、346～355位、357～363位、370～383位、385～387位、389～394位、405～410位和423～431位的氨基酸序列組成的同源性區(qū)域中的氨基酸序列與該阿馬多里酶的對應(yīng)位置的同源性區(qū)域中的氨基酸序列有90％以上的序列同源性，且具有脫氫酶活性的阿馬多里酶；或者
(iv)所述(i)的阿馬多里酶中，該阿馬多里酶的全長氨基酸序列與序列號1、序列號3、序列號6、序列號9、序列號10、序列號11、序列號44、序列號53或序列號67的氨基酸序列有80％以上的序列同源性，且具有脫氫酶活性的阿馬多里酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的阿馬多里酶，其為如下的阿馬多里酶：
序列號1所示的氨基酸序列中280位所對應(yīng)位置的氨基酸被取代為選自由谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸和天冬酰胺構(gòu)成的組的極性氨基酸；選自由天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸和組氨酸構(gòu)成的組的帶電氨基酸；或者選自由甲硫氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸構(gòu)成的組的氨基酸；
序列號1所示的氨基酸序列中267位所對應(yīng)位置的氨基酸被取代為甲硫氨酸、亮氨酸、酪氨酸、異亮氨酸、色氨酸、纈氨酸或丙氨酸；
序列號1所示的氨基酸序列中269位所對應(yīng)位置的氨基酸被取代為甲硫氨酸、亮氨酸、酪氨酸、異亮氨酸、色氨酸、纈氨酸或丙氨酸；
序列號1所示的氨基酸序列中54位所對應(yīng)位置的氨基酸被取代為選自由天冬酰胺、丙氨酸、谷氨酰胺、組氨酸、甘氨酸或纈氨酸構(gòu)成的組的氨基酸；或者
序列號1所示的氨基酸序列中241位所對應(yīng)位置的氨基酸被取代為選自由谷氨酰胺、賴氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、精氨酸、天冬氨酸或組氨酸構(gòu)成的組的氨基酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的阿馬多里酶，其為如下的阿馬多里酶：
序列號1所示的氨基酸序列中280位所對應(yīng)位置的氨基酸被取代為谷氨酰胺、絲氨酸、組氨酸、蘇氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸或甲硫氨酸；
序列號1所示的氨基酸序列中267位所對應(yīng)位置的氨基酸被取代為甲硫氨酸、亮氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或色氨酸；
序列號1所示的氨基酸序列中269位所對應(yīng)位置的氨基酸被取代為甲硫氨酸、亮氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或色氨酸；
序列號1所示的氨基酸序列中54位所對應(yīng)位置的氨基酸被取代為天冬酰胺或丙氨酸；或者
序列號1所示的氨基酸序列中241位所對應(yīng)位置的氨基酸被取代為谷氨酰胺、谷氨酸或賴氨酸。
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