[發(fā)明專利]角膜內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201580057199.4
• 申請日: 2015-09-04
• 公開（公告）號: CN107075485B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 西田幸二;辻川元一;原進(jìn);川崎諭;吉原正仁;伊藤昌可;川路英哉;大宮寬子
• 申請（專利權(quán)）人: 國立大學(xué)法人大阪大學(xué)
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12Q1/6883;G01N33/68
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 張晶;謝順星

提供了在角膜內(nèi)皮細(xì)胞中特異性表達(dá)的分子標(biāo)記，使用該標(biāo)記生產(chǎn)一個或多個角膜內(nèi)皮細(xì)胞的方法以及使用該標(biāo)記評估一個或多個角膜內(nèi)皮細(xì)胞的方法。使用選自ZP4、MRGPRX3、GRIP1、GLP1R、HTR1D和CLRN1的組中的至少一種分子作為角膜內(nèi)皮細(xì)胞的特異性標(biāo)記。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及在角膜內(nèi)皮細(xì)胞中特異性表達(dá)的分子標(biāo)記，使用該標(biāo)記生產(chǎn)角膜內(nèi)皮細(xì)胞的方法以及使用該標(biāo)記評估角膜內(nèi)皮細(xì)胞的方法。

背景技術(shù)

角膜是眼球的透明前部。從前面，角膜具有角膜上皮、Bowman膜、角膜基質(zhì)、Descemet膜和角膜內(nèi)皮。角膜上皮存在于角膜的最外部，并且作為保護(hù)角膜免受外來物質(zhì)(例如灰塵和細(xì)菌)的屏障。Bowman膜被認(rèn)為是作為角膜上皮的基底(base)。角膜基質(zhì)是三層(即角膜上皮、角膜基質(zhì)和角膜內(nèi)皮)中最厚的層，并保持角膜的強(qiáng)度。Descemet膜位于角膜基質(zhì)下方，并將角膜基質(zhì)與角膜內(nèi)皮連接。角膜內(nèi)皮是單層，其中六角形角膜內(nèi)皮細(xì)胞有規(guī)律地排列成鵝卵石狀；它在通過其屏障和泵送功能防止前房中的水分滲透到角膜基質(zhì)中以維持角膜透明度，同時通過將角膜中的水分排出到前房中來維持液體平衡方面起到關(guān)鍵作用。

由于遺傳或外部因素引起的細(xì)胞損傷導(dǎo)致的大量角膜內(nèi)皮細(xì)胞的損失削弱了上述功能，導(dǎo)致角膜水腫。嚴(yán)重的角膜內(nèi)皮功能障礙損害角膜透明度的維持。如果發(fā)生大皰性角膜病，則可能導(dǎo)致明顯的視力喪失。

角膜內(nèi)皮細(xì)胞在人體中的增殖能力非常有限。目前治療嚴(yán)重角膜內(nèi)皮功能障礙的最有效、最基本的方法是角膜移植。事實上，大皰性角膜病變是最常進(jìn)行角膜移植的疾病。盡管全層角膜移植在過去已經(jīng)用于角膜內(nèi)皮功能障礙，但是存在諸如長期供體短缺和移植排斥的問題。為了減小排斥，已經(jīng)開發(fā)了僅將包含角膜內(nèi)皮的部分組織移植到患有病癥的眼睛的技術(shù)(Descemet's Stripping Automated Endothelial Keratoplasty:DSAEK)。然而，DSAEK也不能克服供體短缺。還嘗試了體外生長角膜內(nèi)皮細(xì)胞并在治療中使用該細(xì)胞(非專利文獻(xiàn)1和專利文獻(xiàn)1-3)。然而，重復(fù)的傳代引起遺傳轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致其功能喪失(非專利文獻(xiàn)2)。

為了解決上述問題，為移植的目的，對由臍帶血來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(非專利文獻(xiàn)3)、骨髓源性細(xì)胞(非專利文獻(xiàn)4)、虹膜來源的干細(xì)胞(非專利文獻(xiàn)5)、角膜基質(zhì)來源的干細(xì)胞(非專利文獻(xiàn)6)、胚胎干細(xì)胞(非專利文獻(xiàn)7)和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(專利文獻(xiàn)4)等誘導(dǎo)角膜內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行了大量研究。然而，不管細(xì)胞的來源如何，由此獲得的培養(yǎng)細(xì)胞除了角膜內(nèi)皮細(xì)胞之外還包含不同類型的細(xì)胞。因此，在這些研究中，可用于分離和評估角膜內(nèi)皮細(xì)胞(即其目標(biāo)產(chǎn)物)的角膜內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記是不可缺少的。

目前，使用ZO-1(非專利文獻(xiàn)8)、Na⁺-K⁺-ATPase(非專利文獻(xiàn)9)和N-鈣粘著蛋白(非專利文獻(xiàn)10)等蛋白質(zhì)作為角膜內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記。然而，這些蛋白質(zhì)在許多其它類型的細(xì)胞中非特異性表達(dá)(非專利文獻(xiàn)11-13)。因此，使用這些蛋白質(zhì)分離角膜內(nèi)皮細(xì)胞預(yù)期不會產(chǎn)生令人滿意的結(jié)果，特別是考慮到用于誘導(dǎo)分化成角膜內(nèi)皮細(xì)胞的干細(xì)胞的多向潛能。

引證列表

專利文獻(xiàn)

專利文獻(xiàn)1：WO2006/092894A1

專利文獻(xiàn)2：WO2011/096593A1

專利文獻(xiàn)3：WO2013/012087A1

專利文獻(xiàn)4：WO2013/051722A1

非專利文獻(xiàn)