[發明專利]具有鎖核酸的序列轉換和信號擴增DNA以及使用其的檢測方法

有效

• 申請號: 201580056020.3
• 申請日: 2015-10-13
• 公開（公告）號: CN107075585B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 小宮健;小森誠;吉村徹
• 申請（專利權）人: 雅培實驗室;國立大學法人東京工業大學
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/682;C12N15/11
• 代理公司: 北京市中倫律師事務所 11410
• 代理人: 石寶忠

1.一種試劑在制備用于檢測樣品中靶核酸的組合物中的用途，所述試劑包含：

第一寡核苷酸，所述第一寡核苷酸在5'至3'方向上包含信號DNA產生序列、核酸內切酶識別位點和包含鎖核酸且與所述靶核酸的3'端互補的序列；

第二寡核苷酸，所述第二寡核苷酸在5'至3'方向上包含與所述第一寡核苷酸的信號DNA產生序列同源的信號DNA產生序列、核酸內切酶識別位點和包含鎖核酸且與所述第一寡核苷酸的信號DNA產生序列同源的序列；

聚合酶；和

用于切口反應的核酸內切酶；

其中所述鎖核酸位于從所述第二寡核苷酸的3'端的位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或其組合處。

2.根據權利要求1所述的用途，其中所述第二寡核苷酸包含2、3或4個鎖核酸。

3.根據權利要求2所述的用途，其中所述鎖核酸位于從所述第二寡核苷酸的3’端的位置3和6處。

4.根據權利要求1所述的用途，其中所述鎖核酸位于發夾結構的莖中。

5.根據權利要求4所述的用途，其中所述莖包含2至10個堿基對。

6.根據權利要求1所述的用途，其中所述與所述靶核酸的3'端互補的序列還包含鎖核酸。

7.根據權利要求1所述的用途，其中當將所述組合物用于檢測所述靶核酸的方法中時，所述方法在基本恒定的溫度下進行，并且其中所述基本恒定的溫度在+/-5℃的范圍內波動。

8.根據權利要求1所述的用途，其中當將所述組合物用于檢測所述靶核酸的方法中時，所述方法在20℃至42℃的溫度下進行。

9.根據權利要求1所述的用途，其中所述聚合酶具有鏈置換活性。

10.根據權利要求1所述的用途，其中所述聚合酶是3'至5'核酸外切酶缺乏的、5'至3'核酸外切酶缺乏的或者二者。

11.根據權利要求1所述的用途，其中所述聚合酶包含選自由如下組成的組中的DNA聚合酶：從大腸桿菌獲得的DNA聚合酶I的Klenow片段、從嗜熱脂肪芽孢桿菌獲得的5'至3'核酸外切酶缺乏型Bst DNA聚合酶、和從熱堅芽孢桿菌獲得的5'至3'核酸外切酶缺乏型BcaDNA聚合酶。

12.根據權利要求1所述的用途，其中所述核酸內切酶是選自由Nb.BbvCI、Nt. AlwI、Nt.BbvCI和Nt.BsmAI所組成的組中的酶。

13.根據權利要求1所述的用途，其中所述靶核酸是微RNA。

14.根據權利要求1所述的用途，其中所述靶核酸來源于感染物。

15.一種用于檢測樣品中靶核酸的組合物，所述組合物包含：

第一寡核苷酸，所述第一寡核苷酸在5’至3’方向上包含信號DNA產生序列、核酸內切酶識別位點和包含鎖核酸且與所述靶核酸的3’端互補的序列；

第二寡核苷酸，所述第二寡核苷酸在5’至3’方向上包含與所述第一寡核苷酸的信號DNA產生序列同源的信號DNA產生序列、核酸內切酶識別位點和包含鎖核酸且與所述第一寡核苷酸的信號DNA產生序列同源的序列；

其中所述鎖核酸位于從所述第二寡核苷酸的3’端的位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或其組合處。

16.根據權利要求15所述的組合物，其中所述鎖核酸位于從所述第二寡核苷酸的3’端的位置3和6處。

17.根據權利要求15所述的組合物，其中所述鎖核酸位于發夾結構的莖中。