[發明專利]一種誘導的多巴胺能前體組合物及其制備方法

在審

• 申請號: 201580054926.1
• 申請日: 2015-08-19
• 公開（公告）號: CN107148471A
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發明（設計）人: 鄭加麟;田長海
• 申請（專利權）人: 同濟大學;內布拉斯加大學董事會
• 主分類號: C12N5/0797
• 分類號: C12N5/0797;C12N5/10;C12N15/63;C12Q1/68;A61K48/00
• 代理公司: 北京策略律師事務所11546
• 代理人: 彭敏

1.誘導的多巴胺能前體(iDP)，包括選自以下的異位表達的基因或蛋白質：

(1)Brn2和Brn4中的一個或兩個，或其變體，

(2)Sox2或其變體，和

(3)Foxa2和Lmx1a中的一種或兩種，或其變體，

在不是多巴胺能前體的體細胞中。

2.如權利要求1所述的iDP，其特征在于，其包含異位表達的Brn2或其變體，Sox2或其變體和Foxa2或其變體。

3.如權利要求1或2所述的iDP，其特征在于，所述異位表達的基因由攜帶它們的一種或多種載體表達，或所述異位表達的蛋白由編碼它們的一種或多種mRNA表達。

4.如權利要求1或2所述的iDP，其特征在于，所述iDP是多巴胺能神經元譜系限制性祖細胞，并且不分化成神經膠質細胞。

5.如權利要求1或2所述的iDP，其特征在于，iDP的分化不依賴于選自SHH和FGF8的形態發生素。

6.如權利要求1或2所述的iDP，其特征在于，所述iDP還包含異位表達的L-Myc。

7.如權利要求6所述的iDP，其特征在于，所述異位表達的L-Myc在多西環素的控制下表達。

8.如權利要求1,2或7中任一項所述的iDP，其特征在于，所述體細胞是成纖維細胞。

9.如權利要求8所述的iDP，其特征在于，所述體細胞在體外存在。

10.如權利要求1,2或7中任一項所述的iDP，其特征在于，其用于治療神經變性疾病，所述神經變性疾病選自：帕金森病，抑郁癥，癡呆和精神分裂癥。

11.如權利要求1,2或7中任一項所述的iDP群體，其特征在于，所述群體總數超過80％或超過90％能夠分化成多巴胺能神經元。

12.一種將體細胞轉分化為iDP的方法，其特征在于，在不是多巴胺能前體的體細胞中，包括異位表達選自以下的基因：(1)Brn2和Brn4中的一個或兩個，(2)Sox2和(3)Foxa2和Lmx1a中的一個或兩個，或任何一種或多種前述的變體。

13.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述方法包括在體細胞中異位表達Brn2，Sox2和Foxa2，或前述任何一種或多種的變體。

14.如權利要求12或13所述的方法，其特征在于，所述體細胞是成纖維細胞。

15.如權利要求14所述的方法，其特征在于，所述體細胞在體外存在。

16.如權利要求12或13所述的方法，其特征在于，所述體細胞來自需要用iDP進行細胞或組織替代治療的患者。

17.如權利要求16所述的方法，其特征在于，所述患者患有帕金森病，抑郁癥，癡呆或精神分裂癥。

18.一種治療神經變性疾病的方法，其特征在于，包括對有需要的患者施用權利要求1，2和7中任一項所述的iDP。

19.如權利要求18所述的方法，其特征在于，所述神經變性疾病是帕金森病，抑郁癥，癡呆或精神分裂癥。

20.一種鑒定調節多巴胺能神經元發育藥劑的方法，其特征在于，包括權利要求1，2和7中任一項所述iDP群體受測試劑，其中所述iDP分化為多巴胺能神經元的變化指示測試試劑在多巴胺能神經元發育中的調節作用。

21.如權利要求20所述的方法，其特征在于，所述變化是以下的一種或多種：細胞生長，細胞存活或一種或更多基因表達變化，如酪氨酸羥化酶(TH)，Sox1，PAX6，ZBTB16，Sox3，CD133，巢蛋白(Nestin)，Aldh1A1，Corin(Lrp4)，Lmx1a，Msx1，Ngn2，Otx2，Mash1，Pitx3和Nkx6.1，多唾液酸神經細胞粘附分子(PSA-NCAM)和/或微管相關蛋白(DCX)。

22.如權利要求20或21的方法，其特征在于，所述iDP從患者的體細胞轉分化而來，其中所述患者患有帕金森病，抑郁癥，癡呆或精神分裂癥，并且其中所述方法鑒定用于治療帕金森病，抑郁癥，癡呆或精神分裂癥的藥劑。