[發明專利]使用色譜分離富集來檢測分析物的方法

在審

• 申請號: 201580054559.5
• 申請日: 2015-10-05
• 公開（公告）號: CN106796231A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 尼爾·帕西;格雷戈里·W·西頓
• 申請（專利權）人: 3M創新有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/569
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司11219
• 代理人: 梁曉廣,車文

相關申請的交叉引用

本專利申請要求2014年10月7日提交的美國臨時專利申請62/060,618的優先權，該專利申請的公開內容全文以引用方式并入本文。

背景技術

在一些情況下，檢測復雜基質(如，食物、創傷流出物、唾液、痰、糞便)中的特定細胞(如，微生物)可能較為困難，因為基質包含與檢測系統的一種或多種組分干擾的物質(如，生物分子、酶、化學品、離子)。因此，操作人員通常使用各種方法來降低基質中所發現物質的抑制作用。一種降低基質效應的方法是稀釋含基質的樣本，以降低抑制物質的濃度。然而，此方法可限制測試的總體檢測靈敏度。

降低樣本基質效應的另一種方法是使用免疫磁性分離(IMS)來隔離和/或凈化所關注的細胞，如Chen等人在“Automated immunomagnetic separation for the detection of Escherichia coli O157:H7from spinach”(用于檢測菠菜中大腸桿菌O157:H7的自動免疫磁性分離，2014年，國際食品微生物學雜志，179:33-37)中對此有所描述。該方法已經得到普及，因為該方法已被自動化以消除需要操作人員干預來實現從基質材料有用地分離靶細胞的步驟。此外，使用IMS方法已得到改進的檢測靈敏度。

盡管在樣本制備中有進步，仍然需要用于制備樣本以檢測分析物(例如，與靶細胞相關聯的分析物)的簡單、快速的方法。

發明內容

一般來講，本公開涉及用于檢測靶分析物(例如，與特定細胞、特定微生物或微生物群的存在相關聯的分析物)的方法和裝置。具體地講，本公開涉及使用色譜分離裝置在色譜分離裝置內的預定位置處富集靶分析物，并隨后從裝置釋放預定位置和/或靶分析物。在從裝置釋放預定位置和/或靶分析物之后，可以使用本領域已知的各種檢測過程中的一種或多種來檢測和任選地識別細胞。有利的是，本公開的方法和裝置相對于非靶分析物和可以其它方式干擾靶分析物的檢測的其它顆粒或分子來富集靶分析物。此外，通過該方法實現的富集提供了靶分析物的檢測的增加的靈敏度，特別是當靶分析物以低濃度存在于樣本中時。

在一個方面，本公開提供了檢測靶微生物的第一方法。該方法可包括使液體樣本接觸樣本制備裝置的多孔載體，所述裝置包括具有第一開口和第二開口的殼體以及多孔載體。多孔載體包括位于第一預定位置處的樣本接收區和位于第二預定位置處的靶分析物結合區，多孔載體限定從樣本接收區延伸穿過靶分析物結合區的第一流體通路。第二流體通路穿過殼體從第一開口延伸到第二開口，該第二流體通路在靶分析物結合區與多孔載體相交。第一方法還可包括：允許液體樣本的至少一部分從樣本接收區朝向靶分析物結合區縱向移動穿過多孔載體；在液體的至少一部分移動到靶分析物結合區之后，迫使脫離構件穿過第二流體通路從第一開口到達第二開口，并從而排出靶分析物結合區的一部分；以及處理靶分析物結合區的該部分或從其釋放的細胞，以檢測靶微生物的指示。

在另一方面，本公開提供了檢測靶微生物的第二方法。該方法可包括使液體樣本接觸樣本制備裝置的多孔載體，所述裝置包括具有第一開口和第二開口的殼體，以及多孔載體。多孔載體包括位于第一預定位置處的樣本接收區和位于第二預定位置處的靶分析物結合區，多孔載體限定從樣本接收區延伸穿過靶分析物結合區的第一流體通路。第二流體通路穿過殼體從第一開口延伸到第二開口，該第二流體通路在靶分析物結合區與多孔載體相交。第二方法還可包括：允許液體樣本的至少一部分從樣本接收區朝向靶分析物結合區縱向移動穿過多孔載體；在液體的至少一部分移動到靶分析物結合區之后，迫使靶釋放溶液穿過第二流體通路，并從而從裝置中排出包含靶微生物(如果存在于第二流體通路中)的靶釋放溶液的一部分；以及處理釋放溶液的該部分以檢測靶微生物的指示。

在第一方法和第二方法的上述實施方案中的任一個中，在液體的至少一部分移動到靶分析物結合區之后，該方法還可包括使洗滌溶劑經由第二流體通路穿過多孔載體的步驟。在第一方法和第二方法的上述實施方案中的任一個中，方法還可包括鄰近第二開口定位接收器，其中排出靶分析物結合區的一部分或排出釋放溶液的一部分進一步包括將靶分析物結合區的該部分或釋放溶液的該部分移動到接收器中。