[發(fā)明專利]制備萊鮑迪苷I的方法以及用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580054180.4
• 申請(qǐng)日: 2015-08-19
• 公開（公告）號(hào): CN106795523B
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 因德拉·普拉卡什;辛西婭·邦德斯;阿韋季克·馬爾科相·馬爾科相;西里爾·加林;羅伯特·特爾·哈雷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 譜賽科有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12N15/81
• 分類號(hào): C12N15/81
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明

1.一種制備萊鮑迪苷I組合物的方法，包括：

使包含萊鮑迪苷A的起始組合物與能夠?qū)⑷R鮑迪苷A轉(zhuǎn)化為萊鮑迪苷I的生物催化劑接觸以提供包含萊鮑迪苷I的組合物；

其中該生物催化劑是UGT；

其中該UGT是UGT76G1變體；并且

其中該UGT76G1變體選自下組，該組由以下組成：

UGT76G1-R1-F12，其中UGT76G1-R1-F12中的突變點(diǎn)是：Q266E、P272A、R334K、G348P和L379G；

UGT76G1-R2-B9，其是具有額外的突變點(diǎn)S42A、F46I和I407V的UGT76G1-R1-F12；和

UGT76G1-R3-G3，其是具有額外的突變點(diǎn)I46L、K303G和K393R的UGT76G1-R2-B9。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該UGT以選自純形式、粗裂解物或全細(xì)胞懸液的形式提供。

3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中該UGT以微生物提供。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中萊鮑迪苷A以純形式提供，或以含有按重量計(jì)至少50%的萊鮑迪苷A的甜菊醇糖苷混合物或甜葉菊提取物提供。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中該萊鮑迪苷I組合物包含按重量計(jì)大于1%的萊鮑迪苷I。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包括分離萊鮑迪苷I以提供分離的萊鮑迪苷I組合物。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，進(jìn)一步包括純化所分離的萊鮑迪苷I組合物以提供高度純化的萊鮑迪苷I，該高度純化的萊鮑迪苷I包含按重量計(jì)大于80%的萊鮑迪苷I。

8.一種制備高度純化的萊鮑迪苷I組合物的方法，包括：

a. 使包含萊鮑迪苷A的起始組合物與UGT76G1變體組和UDP-葡萄糖接觸以形成包含萊鮑迪苷I的組合物，并且通過提供蔗糖合酶和蔗糖來伴隨地再循環(huán)UDP-葡萄糖；

其中UGT76G1變體組選自下組，該組由以下組成：

UGT76G1-R1-F12，其中UGT76G1-R1-F12中的突變點(diǎn)是：Q266E、P272A、R334K、G348P和L379G；

UGT76G1-R2-B9，其是具有額外的突變點(diǎn)S42A、F46I和I407V的UGT76G1-R1-F12；和

UGT76G1-R3-G3，其是具有額外的突變點(diǎn)I46L、K303G和K393R的UGT76G1-R2-B9；

b. 分離萊鮑迪苷I以形成分離的萊鮑迪苷I組合物；并且

c. 純化所分離的萊鮑迪苷I組合物以提供高度純化的萊鮑迪苷I組合物；其中該高度純化的萊鮑迪苷I包含按重量計(jì)大于80%的萊鮑迪苷I。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，進(jìn)一步包括：

a. 使包含甜菊苷的組合物與UGT76G1和UDP-葡萄糖接觸以提供包含萊鮑迪苷A的組合物，并且

b. 分離萊鮑迪苷A。

10.如權(quán)利要求8所述的方法，進(jìn)一步包括：

a. 使包含甜葉懸鉤子苷的組合物與UGT91D2和UDP-葡萄糖接觸以提供包含甜菊苷的組合物；并且

b.分離甜菊苷。