[發明專利]使用空腸彎曲桿菌CRISPR/CAS系統衍生的RNA引導的工程化核酸酶的基因編輯

有效

• 申請號: 201580052262.5
• 申請日: 2015-08-06
• 公開（公告）號: CN106922154B
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發明（設計）人: 金殷智;金奭中
• 申請（專利權）人: 基因工具股份有限公司;基礎科學研究院
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N1/21;C12N9/16
• 代理公司: 深圳市銘粵知識產權代理有限公司 44304
• 代理人: 孫偉峰

1.一種組合物，其包含：

識別SEQ ID NO：1的原間隔序列鄰近基序序列的Cas蛋白或編碼所述Cas蛋白的核酸；

其中所述Cas蛋白是空腸彎曲桿菌Cas9蛋白；和

引導RNA，所述引導RNA包括用于CRISPR-Cas系統的crRNA和tracrRNA，或者編碼所述引導RNA的DNA；

其中所述crRNA具有能夠與鄰近所述SEQ ID NO：1的原間隔序列鄰近基序序列的靶DNA序列的互補鏈形成雙鏈體的序列和所述crRNA的必要部分的序列。

2.如權利要求1的組合物，其中所述組合物進一步包含核定位信號。

3.如權利要求1所述的組合物，其中所述Cas蛋白由SEQ ID NO：22組成。

4.如權利要求1所述的組合物，其中所述引導RNA是雙引導RNA。

5.如權利要求1所述的組合物，其中所述引導RNA是所述crRNA和所述tracrRNA彼此融合的單引導RNA。

6.如權利要求1所述的組合物，其中所述能夠與所述靶DNA序列的互補鏈形成雙鏈體的序列具有17至23bp的長度。

7.如權利要求6所述的組合物，其中所述能夠與所述靶DNA序列的互補鏈形成雙鏈體的序列具有21至23bp的長度。

8.如權利要求1所述的組合物，其中所述引導RNA還包含在能夠與靶DNA序列的互補鏈形成雙鏈體的序列的5′端之前的一至三個附加核苷酸。

9.如權利要求8所述的組合物，其中所述附加核苷酸包含鳥嘌呤。

10.如權利要求1所述的組合物，其中所述Cas蛋白具有核酸酶或切口酶活性。

11.如權利要求10所述的組合物，其中所述具有切口酶活性的Cas蛋白在SEQ ID NO：22的位置8處的催化性天冬氨酸或SEQ ID NO：22的位置559處的組氨酸被其它氨基酸所取代。

12.如權利要求11所述的組合物，其中所述其它氨基酸是丙氨酸。

13.如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物用于利用SEQ ID NO：1的原間隔序列鄰近基序序列切割所述靶DNA。

14.如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物用于編輯包含SEQ ID NO：1的原間隔序列鄰近基序序列的基因組。

15.如權利要求1所述的組合物，其中所述Cas蛋白是失活形式。

16.如權利要求15所述的組合物，其中所述是失活形式的Cas蛋白在SEQ ID NO：22的位置8處的催化性天冬氨酸和SEQ ID NO：22的位置559處的組氨酸被其它氨基酸所取代。

17.如權利要求16所述的組合物，其中所述其它氨基酸是丙氨酸。

18.如權利要求15所述的組合物，其中所述組合物的特征在于所述Cas蛋白結合包含SEQ ID NO：1的原間隔序列鄰近基序序列的靶DNA序列，而不切割靶DNA。

19.如權利要求15所述的組合物，其中所述Cas蛋白還包含轉錄效應子結構域。

20.如權利要求15所述的組合物，其中所述組合物用于Cas-介導的基因表達調節，所述基因表達調節包括轉錄調節或表觀遺傳調節。