[發明專利]用于生產蛋白質的經改進的宿主細胞

有效

• 申請號: 201580051413.5
• 申請日: 2015-07-24
• 公開（公告）號: CN106715681B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: C·斯派爾;J·卡韋倫內;B·米歇爾
• 申請（專利權）人: R·P·謝勒科技有限責任公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/65;C12P21/02
• 代理公司: 北京世峰知識產權代理有限公司 11713
• 代理人: 王思琪;王建秀

1.細菌宿主細胞，其中所述宿主細胞包含插入在所述宿主細胞基因組中的至少2個染色體拷貝的編碼相同的毒物蛋白的核酸序列，和至少1個拷貝的編碼針對所述毒物蛋白的解毒劑蛋白的核酸序列，條件是所述至少2個拷貝在與編碼針對所述毒物蛋白的解毒劑蛋白的所述核酸序列不同的復制子中，其中所述毒物蛋白是CcdB，所述解毒劑蛋白是CcdA，并且其中編碼所述解毒劑蛋白的所述核酸序列由質粒攜帶，所述質粒還包含其中插入有或能夠插入有編碼目的重組肽、多肽或蛋白質的核酸序列的表達系統，其中第二拷貝的編碼所述毒物蛋白的核酸序列在所述宿主細胞基因組中的插入提高了所述目的重組肽、多肽或蛋白質的生產產率。

2.根據權利要求1所述的細菌宿主細胞，其中所述CcdB毒物蛋白由SEQ ID NO:1編碼。

3.根據權利要求1或2所述的細菌宿主細胞，其中所述CcdA解毒劑蛋白由SEQ ID NO:13編碼。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的細菌宿主細胞，其中所述表達系統包含選自包括T7啟動子、Ptrc、Para和Plac的組的啟動子。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的細菌宿主細胞，其中所述表達系統包含T7啟動子，并且所述宿主細胞還包含T7 RNA聚合酶基因。

6.根據權利要求5所述的細菌宿主細胞，其中所述T7 RNA聚合酶基因插入在所述宿主細胞的基因組中。

7.根據權利要求5所述的細菌宿主細胞，其中所述T7 RNA聚合酶基因插入在T7表達系統中。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的細菌宿主細胞，其中所述表達系統包含T7啟動子，并且所述宿主細胞還包含插入在其基因組中的經遺傳修飾噬菌體。

9.根據權利要求8所述的細菌宿主細胞，其中所述噬菌體限定為以下噬菌體，其中：

-插入T7表達系統，

-S、R和/或Q基因失活，并且

-Int和/或Xis基因失活。

10.根據權利要求1至9中任一項所述的細菌宿主細胞，其是革蘭氏陰性細菌。

11.根據權利要求10所述的細菌宿主細胞，其是腸桿菌科(Enterobacteriacea)。

12.根據權利要求11所述的細菌宿主細胞，其是大腸桿菌(E.coli)。

13.根據權利要求1至12中任一項所述的細菌宿主細胞，其還包含基因tonA、galK、araB、araA、lon、ompT、rcsA、hsdR、mrr、endA和recA中至少一個基因的失活。

14.根據權利要求1至13中任一項所述的細菌宿主細胞，其還包含至少一個額外拷貝的gyrA基因。

15.一種試劑盒，其包含：

-根據權利要求1至14中任一項所述的細菌宿主細胞，所述宿主細胞包含至少2個染色體拷貝的編碼相同的毒物蛋白的核酸序列，和

-載體，所述載體包含至少一個拷貝的編碼解毒劑蛋白的核酸序列和至少一個拷貝的表達系統，其中所述表達系統插入有或能夠插入有編碼目的重組肽、多肽或蛋白質的核酸序列，

其中所述毒物蛋白是CcdB，所述解毒劑蛋白是CcdA。

16.根據權利要求15所述的試劑盒，其中編碼目的重組肽、多肽或蛋白質的所述核酸序列在選自包括T7啟動子、Ptrc、Para和Plac的組的啟動子控制之下。