[發(fā)明專利]作為疫苗有用的經(jīng)基因修飾的球蟲(chóng)寄生蟲(chóng)

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580049092.5
• 申請(qǐng)日: 2015-09-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107075449A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尼西斯·古普特;魯本·阿羅佑-歐拉特;理查德·盧修斯;喬斯·布勞韋斯;J.貝恩德·赫爾姆斯;艾爾迪克·杜內(nèi)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 柏林洪堡大學(xué);烏得勒支大學(xué)控股有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/11
• 分類號(hào): C12N1/11;C12N1/36;C12N9/12;C12N15/54
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司32103
• 代理人: 李萍

1.一種選自弓形蟲(chóng)種、新孢子蟲(chóng)種和艾美耳球蟲(chóng)種的球蟲(chóng)寄生蟲(chóng)，其中磷脂酰蘇氨酸合酶(PTS)的表達(dá)被破壞從而減少或消除磷脂酰蘇氨酸(PtdThr)的合成。

2.如權(quán)利要求1所述的球蟲(chóng)寄生蟲(chóng)，所述球蟲(chóng)寄生蟲(chóng)選自剛地弓形蟲(chóng)、犬新孢子蟲(chóng)和柔嫩艾美耳球蟲(chóng)，或者所述球蟲(chóng)寄生蟲(chóng)是剛地弓形蟲(chóng)。

3.如權(quán)利要求1或2所述的球蟲(chóng)寄生蟲(chóng)，其中所述PtdThr是式(I)所示的PtdThr:

(I)

其中R₁和R₂獨(dú)立地選自具有8至46個(gè)碳原子的飽和?；?或具有8至46個(gè)碳原子的不飽和?；?。

4.如權(quán)利要求1至3中任一所述的球蟲(chóng)寄生蟲(chóng)，其中所述PTS酶的表達(dá)通過(guò)使相應(yīng)的PTS編碼基因失活或刪除相應(yīng)的PTS編碼基因被破壞。

5.如權(quán)利要求1至4中任一所述的球蟲(chóng)寄生蟲(chóng)，其中所述PTS酶的表達(dá)通過(guò)滅活或刪除編碼與剛地弓形蟲(chóng)PTS (SEQ ID No. 2)、犬新孢子蟲(chóng)PTS (SEQ ID No. 4)或柔嫩艾美耳球蟲(chóng)PTS (SEQ ID No. 6)具有至少30%的一致性的蛋白質(zhì)序列的核苷酸序列被破壞，特別地所述蛋白質(zhì)序列與剛地弓形蟲(chóng)PTS (SEQ ID No. 2)、犬新孢子蟲(chóng)PTS (SEQ ID No. 4)或柔嫩艾美耳球蟲(chóng)PTS (SEQ ID No. 6)具有至少50%的一致性，更特別地具有至少75%的一致性，進(jìn)一步特別地具有至少90%的一致性，更進(jìn)一步特別地具有至少95%的一致性，還具有至少99%的一致性。

6.如權(quán)利要求1至5中任一所述的球蟲(chóng)寄生蟲(chóng)，其中所述PTS酶的表達(dá)通過(guò)刪除或替換多核苷酸序列被破壞，所述多核苷酸序列包括編碼用于PTS的催化位點(diǎn)的核苷酸。

7.如權(quán)利要求1至6中任一所述的球蟲(chóng)寄生蟲(chóng)用作疫苗。

8.一種用于制備如權(quán)利要求1至7中任一所述的基因修飾的球蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的方法，其包括通過(guò)使編碼PTS的基因失活或刪除所述編碼PTS的基因來(lái)破壞磷脂酰蘇氨酸合酶(PTS)在選自弓形蟲(chóng)種、新孢子蟲(chóng)種和艾美耳球蟲(chóng)種的球蟲(chóng)寄生蟲(chóng)中的表達(dá)從而減少或消除磷脂酰蘇氨酸(PtdThr)的合成。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其包括通過(guò)單同源重組或雙同源重組來(lái)使所述編碼PTS酶的基因失活或刪除所述編碼PTS酶的基因。

10.一種包含編碼磷脂酰蘇氨酸合酶(PTS)的核苷酸序列的多核苷酸。

11.如權(quán)利要求10所述的多核苷酸，其包括編碼PTS酶的核苷酸序列，該P(yáng)TS酶具有與剛地弓形蟲(chóng)PTS (SEQ ID No. 2)、犬新孢子蟲(chóng)PTS (SEQ ID No. 4)或柔嫩艾美耳球蟲(chóng)PTS (SEQ ID No. 6)有至少30%的一致性的氨基酸序列，特別地所述氨基酸序列與剛地弓形蟲(chóng)PTS (SEQ ID No. 2)、犬新孢子蟲(chóng)PTS (SEQ ID No. 4)或柔嫩艾美耳球蟲(chóng)PTS (SEQ ID No. 6)具有至少50%的一致性，更特別地具有至少75%的一致性，進(jìn)一步特別地具有至少90%的一致性，更進(jìn)一步特別地具有至少95%的一致性，還具有至少99%的一致性。

12.一種由如權(quán)利要求10或11所述的核苷酸序列編碼的磷脂酰蘇氨酸合酶(PTS)。

13.一種式(I)所示的磷脂酰蘇氨酸(PtdThr)脂質(zhì)：

(I)

其中R₁和R₂獨(dú)立地選自具有8至46個(gè)碳原子的飽和?；?或具有8至46個(gè)碳原子的不飽和?；?/p>

14.如權(quán)利要求13所述的磷脂酰蘇氨酸，其中R₁和R₂獨(dú)立地選自具有16至24個(gè)碳原子的飽和酰基和/或具有16至24個(gè)碳原子的不飽和酰基。

15.一種通過(guò)給予動(dòng)物或人以如權(quán)利要求1至6中任一所述的球蟲(chóng)寄生蟲(chóng)來(lái)給所述動(dòng)物或人接種疫苗的方法。

16.如權(quán)利要求15所述的方法，其用于給選自羊、豬、家禽和牛的動(dòng)物接種疫苗。