[發明專利]基于RGMa片段的診斷測定

在審

• 申請號: 201580048412.5
• 申請日: 2015-09-09
• 公開（公告）號: CN107076757A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: S.巴霍恩;B.K.米勒;M.施米德特;A.斯特里賓格
• 申請（專利權）人: 艾伯維德國有限責任兩合公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;A61K31/58;A61P25/16;A61P25/14;A61P25/00;A61P25/28;A61P27/02;A61P27/06;A61P3/02
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 李唐,周齊宏

發明領域

本發明涉及用于檢測和測定樣品中RGMa片段的測定法，以及該測定法用于確定、優化、預測和監測患有神經變性疾病的主體中的治療的用途。

背景

多發性硬化(MS)是一種中樞神經系統的慢性炎性疾病。當前可用的伴有釓應用的MRI技術顯現在疾病過程期間發生的多種病變并用作生物標志物。然而，腦脊液(CSF)和蛋白的研究可進一步理解疾病進展、慢性炎癥和對治療(諸如鞘內延遲釋放類固醇應用)的反應之間的相互作用。

軸突再生的過程改善多發性硬化的臨床結果。已知在髓磷脂和神經膠質結構中存在幾種再生抑制劑，即髓磷脂相關糖蛋白；NogoA、OMgp(少突膠質細胞髓磷脂糖蛋白)。另一種抑制劑為排斥導向分子A(RGMa)，其還阻礙神經元再生和功能恢復。RGMa是一種糖基磷脂酰肌醇(GPI)錨定糖蛋白，其為神經突生長的有效抑制劑且作為在CNS創傷或炎癥后抑制神經元再生和功能恢復的重要因子出現。RGMa以膜結合和可溶形式存在，其對于神經突生長均為抑制性的。RGMa已定位于患有創傷性腦損傷或缺血性中風的人中的CNS髓磷脂、新鮮病變以及成熟疤痕組織中。

存在于腦和脊髓中的RGMa和其片段可促進神經變性且抑制神經再生。RGMa影響神經纖維的再生以及神經元的變性。使用基于ELISA的測定法檢測RGMa種類，以鑒定再生活性的抑制。然而，這些測定法缺乏區分具有不同大小的RGMa片段的能力且通常不顯示檢測不同RGMa片段所需的高靈敏度水平。此外，基于ELISA的測定法因為體液中的蛋白量低而不能檢測到RGMa。需要一種具有較高靈敏度且可檢測和區分RGMa片段以及將RGMa片段與患有MS或任何其他神經變性疾病的患者中的增強的功能恢復和再生相關聯的診斷測定法。

發明概述

本發明涉及檢測和定量樣品中至少一種RGMa片段的方法。該方法包括(a)從主體獲得包含至少一種RGMa片段的樣品；(b)將該樣品與捕獲結合蛋白接觸，其中該捕獲結合蛋白結合至少一種RGMa片段以形成捕獲結合蛋白-RGMa片段復合物；(c)將該樣品與檢測結合蛋白接觸，其中該檢測結合蛋白與捕獲結合蛋白相互作用以形成檢測結合蛋白-捕獲結合蛋白RGMa片段復合物，以及(d)檢測和定量樣品中至少一種RGMa片段。至少一種RGMa片段可以是具有約1kDa至約65kDa的大小的RGMa片段。該RGMa片段可具有10kDa、18kDa、20kDa、30kDa、40kDa、50kDa或65kDa的大小。RGMa片段可選自18kDa RGMa片段、30kDa RGMa片段和40kDa RGMa片段。在步驟(b)前，可利用凝膠電泳分離至少一種RGMa片段。可檢測至少兩種RGMa片段。至少兩種RGMa片段的大小可以是30kDa和40kDa。可檢測至少三種RGMa片段。該至少三種RGMa片段的大小可以是18kDa、30kDa和40kDa。至少一種RGMa片段可以是可溶性RGMa片段。該RGMa片段的大小可通過SDS-PAGE測定。SDS PAGE可以是4-15%。捕獲結合蛋白可以是RGMa-選擇性抗體。該抗體可以是生物素化RGMa-選擇性抗體。檢測結合蛋白可以是四價抗生物素蛋白且可檢測標記可以是生物素化辣根過氧化物酶。可使用過氧化物酶染色試劑盒檢測至少一種RGMa片段。該RGMa片段可以是人RGMa片段。方法樣品可包含腦脊液、血液、血清或血漿。