[發(fā)明專利]使用有機溶劑除去抑制劑的核酸提取

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201580047815.8
• 申請日: 2015-09-04
• 公開（公告）號: CN106715717B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發(fā)明（設計）人: L.陳;J.史蒂文斯;K.施瓦布;J.布恩;D.萊爾利
• 申請（專利權）人: 科技實驗室股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6844
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張文輝

1.用于處理生物樣品以提取核酸的方法，所述方法包括：(a)獲得生物樣品；(b)在提取緩沖液中稀釋所述生物樣品以形成混合物，其中所述提取緩沖液包含：(i) 3 wt. %至10wt. %有機溶劑，其中所述有機溶劑是丙酮或乙醇中的一種或多種；或(ii) 0.5 wt. %至10wt. %有機溶劑，其中所述有機溶劑是丁醇；(c)在15℃至35℃的溫度溫育所述混合物5秒至30分鐘，以從所述生物樣品的至少一部分中提取存在于所述生物樣品中的核酸以用于進一步加工；(d)通過在65°C加熱3至5分鐘從所述生物樣品中分離所述核酸的至少一部分；(e)在一種或多種擴增反應緩沖液中稀釋所述核酸的至少一部分以形成擴增混合物；并且(f)在25℃至70℃將所述擴增混合物溫育1至10分鐘。

2.權利要求1的方法，其中所述生物樣品包含一種或多種人樣本、細菌、病毒、寄生物、糞樣品、體液、植物或培養(yǎng)物。

3.權利要求1的方法，其中從所述生物樣品中分離所述核酸的至少一部分包括用濾器過濾所述混合物。

4.權利要求3的方法，其中所述濾器具有50μm至250μm的孔徑。

5.權利要求3的方法，其中所述濾器包括多孔塑料、多孔聚合纖維或多孔玻璃纖維中的一種或多種。

6.權利要求5的方法，其中所述濾器包括包埋有活性炭的玻璃纖維濾器。

7.權利要求1的方法，所述方法還包括在所述擴增反應緩沖液中稀釋所述核酸的至少一部分之前，將丙酮或乙醇中的一種或多種添加至所述核酸的至少一部分以達到3 wt. %至10 wt. %的濃度，或者將丁醇添加至所述核酸的至少一部分以達到0.5至10wt.%的濃度。

8.權利要求7的方法，其中將丙酮或乙醇中的一種或多種添加至所述核酸的至少一部分包括將乙醇添加至所述核酸的至少一部分。

9.權利要求1的方法，其中所述擴增混合物在50°C-65°C的溫度溫育。

10.權利要求1的方法，其中所述有機溶劑的添加能消除對加熱、酶促消化、溫育、分離、核酸沉淀或洗脫中的一種或多種的需要，其中所述加熱是在95℃以上的溫度進行。

11.權利要求1的方法，其中擴增反應緩沖液是適合于等溫擴增、PCR、測序、基因型分型和雜交的緩沖液。

12.權利要求11的方法，其中等溫擴增包括切口酶相關反應(NEAR)、重組酶聚合酶擴增(RPA)、環(huán)介導的等溫擴增(LAMP)、鏈置換擴增、解旋酶依賴性擴增和滾環(huán)擴增。

13.權利要求1的方法，所述方法還包括在擴增反應中擴增所述核酸的至少一部分。

14.權利要求13的方法，其中使用具有有機溶劑的提取緩沖液但不加熱完成所述擴增。

15.權利要求13的方法，其中使用具有有機溶劑的提取緩沖液在加熱的情況下完成所述擴增。

16.權利要求1的方法，其中所述提取緩沖液包含用于核酸擴增的緩沖液。

17.權利要求7的方法，其中將丁醇添加至所述核酸的至少一部分。