[發(fā)明專利]用于細(xì)胞分離的微流體方法和盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580046190.3
• 申請(qǐng)日: 2015-09-01
• 公開（公告）號(hào): CN107278270B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: N·梅爾莫;N·哈拉吉;X·德羅茲;A·里達(dá);P-A·吉羅德;A·瑞格米;T·科隆貝特;E·蘭孔
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 思蘭克斯有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/569;G01N33/574;B01L3/00
• 代理公司: 余姚德盛專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33239
• 代理人: 鄭洪成

1.一種用于識(shí)別、或者用于識(shí)別以及選擇在其表面上展示所關(guān)注蛋白質(zhì)的細(xì)胞的方法，其包括：

（a）提供包含所述細(xì)胞的樣品；

（b）提供包含一個(gè)或多個(gè)親和基團(tuán)的官能化超順磁珠形式的捕獲珠，以及非官能化鐵磁珠形式的載體珠，其中所述親和基團(tuán)適用于結(jié)合在其表面上展示所述蛋白質(zhì)的細(xì)胞；

（c）在反應(yīng)室中將所述細(xì)胞與所述捕獲珠和所述載體珠混合，

其中所述捕獲珠的所述親和基團(tuán)結(jié)合在其表面上展示所述蛋白質(zhì)的細(xì)胞，從而生產(chǎn)具有磁性標(biāo)記的磁性標(biāo)記細(xì)胞（MLC），

將具有振幅和極性的外部磁場(chǎng)施加于所述反應(yīng)室，其中在所述外部磁場(chǎng)中，通過所述載體珠促進(jìn)捕獲珠與展示所述蛋白質(zhì)的細(xì)胞的混合，

（d）在至少一個(gè)洗滌步驟中，將非磁性標(biāo)記的細(xì)胞與所述磁性標(biāo)記細(xì)胞分離；以及

（e）識(shí)別、或者識(shí)別以及選擇在其表面上展示所述蛋白質(zhì)的細(xì)胞。

2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述所關(guān)注蛋白質(zhì)為標(biāo)志物蛋白或轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物（TEP）。

3.權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述標(biāo)志物蛋白為識(shí)別干細(xì)胞的標(biāo)志物蛋白。

4.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述細(xì)胞為重組細(xì)胞，并且所述樣品包含使用轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)染的所述重組細(xì)胞，其中所述所關(guān)注蛋白質(zhì)為轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物（TEP）；并且其中所述磁性標(biāo)記細(xì)胞在與所述親和基團(tuán)結(jié)合后在一定的時(shí)間間隔內(nèi)失去其磁性標(biāo)記，并且其中基于所述時(shí)間間隔識(shí)別、或者識(shí)別以及選擇細(xì)胞。

5.權(quán)利要求4所述的方法，其中基于所述時(shí)間間隔，將分泌轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物的重組細(xì)胞與展示但不分泌轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物的重組細(xì)胞分離。

6.根據(jù)權(quán)利要求2至3的任意一項(xiàng)所述的方法，其中選擇結(jié)合后在少于1小時(shí)內(nèi)失去磁性標(biāo)記的細(xì)胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求2至3的任意一項(xiàng)所述的方法，其中選擇結(jié)合后在少于24小時(shí)內(nèi)失去磁性標(biāo)記的細(xì)胞。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述捕獲珠與所述載體珠的比例為2:1至50:1。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其進(jìn)一步包括改變所述振幅和/或所述極性，從而限定連續(xù)的操作模式，其中（c）中的所述混合是以混合模式實(shí)施的，并且（d）中所述分離是以珠分離模式實(shí)施的。

10.權(quán)利要求9所述的方法，其中所述細(xì)胞為重組細(xì)胞，并且其中所述在其表面上展示的蛋白質(zhì)為轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物，并且其中（e）中的所述識(shí)別是通過從反應(yīng)室洗脫所述細(xì)胞來實(shí)施的，其中所述細(xì)胞結(jié)合后在少于48小時(shí)內(nèi)失去其磁珠。

11.權(quán)利要求9或10所述的方法，其中在所述混合和珠分離模式中，所述磁場(chǎng)是在1 Hz-1000Hz和0.1至10000mA下以循環(huán)或交替模式施加的。

12.權(quán)利要求9或10所述的方法，其中所述混合模式和/或珠分離模式均持續(xù)不到60秒。