[發明專利]非復制型轉導粒子和基于轉導粒子的報道系統

有效

• 申請號: 201580045870.3
• 申請日: 2015-08-25
• 公開（公告）號: CN107002046B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: D.A.雷;M.雷付斯;X.劉
• 申請（專利權）人: 經緯生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/01;C12N15/74
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 唐華東;黃希貴

1.細菌細胞包裝系統，其用于將報道核酸分子包裝至用于導入細菌細胞的非復制型轉導粒子（NRTP）中，所述包裝系統包括宿主細胞，其包括：

噬菌體基因組，其含有包含破壞的包裝起始位點序列的第一末端酶基因，其中在不存在所述破壞的情況下，所述第一末端酶基因編碼第一末端酶活性，其中所述第一末端酶活性識別包裝起始位點序列，其中所述破壞阻止由第一末端酶活性識別包裝起始位點序列，并且其中所述破壞進一步使得第一末端酶活性無功能；和

含有報道核酸分子的質粒，所述報道核酸分子包含報道基因、含有未破壞的包裝起始位點序列并編碼有功能的第一末端酶活性的第二末端酶基因、和編碼第二末端酶活性的第三末端酶基因，其中所述未破壞的包裝起始位點序列經配置以促進將所述含有報道核酸分子的質粒的復制子包裝至NRTP。

2.權利要求1的細菌細胞包裝系統，其中所述噬菌體基因組包含多個破壞的末端酶基因，其中在破壞不存在的情況下，所述多個破壞的末端酶基因各自編碼末端酶活性，并且其中所述噬菌體基因組上的多個破壞的基因各自通過由報道核酸分子編碼的具功能的未破壞的基因補充。

3.權利要求1至2中任一項的細菌細胞包裝系統，其中所述第一末端酶基因的破壞是經由破壞包裝起始位點的缺失、插入、置換或突變。

4.權利要求1至2中任一項的細菌細胞包裝系統，其中所述第二末端酶基因和第三末端酶基因可操作地連接至條件啟動子。

5.權利要求4的細菌細胞包裝系統，其中所述條件啟動子是噬菌體基因組的末端酶基因的天然啟動子。

6.權利要求4的細菌細胞包裝系統，其中所述第二末端酶基因或第三末端酶基因的表達在不存在噬菌體裂解周期激活的情況下受到抑制，并且其中所述第二末端酶基因或第三末端酶基因的表達在噬菌體的裂解周期的激活后被活化。

7.權利要求1至2中任一項的細菌細胞包裝系統，其中所述噬菌體基因組包含編碼可檢測標記物或可選擇標記物的報道基因并且其中所述報道基因可操作地連接至組成型啟動子。

8.權利要求1至2中任一項的細菌細胞包裝系統，其中所述破壞包括使用編碼可選擇標記物的基因插入或置換第一包裝起始位點序列，并且其中所述編碼可選擇標記物的基因可操作地連接至組成型啟動子。

9.權利要求1至2中任一項的細菌細胞包裝系統，其中所述破壞的包裝起始位點序列包括使用編碼可檢測標記物的基因插入或置換包裝起始位點序列。

10.權利要求1至2中任一項的細菌細胞包裝系統，其中所述含有報道核酸分子的質粒包含復制起點。

11.權利要求1至2中任一項的細菌細胞包裝系統，其中含有報道核酸分子的質粒的復制子包括適合包裝至非復制型轉導粒子中的多聯體。

12.權利要求1至2中任一項的細菌細胞包裝系統，其中所述未破壞的包裝起始位點序列包含多聯體接合點。

13.用于將報道核酸分子包裝至非復制型轉導粒子中的方法，所述方法包括：

-為權利要求1至12中任一項的細菌細胞包裝系統提供條件，所述條件誘導噬菌體基因組的裂解期以產生包裝了含有報道核酸分子的質粒的復制子的非復制型轉導粒子；和

-收集包含含有報道核酸分子的質粒的復制子的非復制型轉導粒子。

14.一種組合物，其包含由權利要求13的方法產生的包含含有報道核酸分子的質粒的復制子的非復制型轉導粒子。