[發明專利]胎兒染色體有無非整倍性的檢測方法

在審

• 申請號: 201580045175.7
• 申請日: 2015-04-28
• 公開（公告）號: CN106661633A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 井上雄喜;石井靖幸;大內彩
• 申請（專利權）人: 富士膠片株式會社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/09
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司11127
• 代理人: 龐東成,張志楠

1.一種胎兒染色體有無非整倍性的檢測方法，該方法包括：

一次擴增工序，擴增由從妊娠母體采集的生物樣品獲得的染色體DNA而得到一次擴增產物；

二次擴增工序，將所述一次擴增產物作為模板，并使用多個引物對進行多個目標區域的多重擴增而得到二次擴增產物；

第一附加工序，對所述二次擴增產物的兩末端附加作為寡核苷酸的第一標記而得到被標記的二次擴增產物；

三次擴增工序，將所述被標記的二次擴增產物作為模板，并使用對所述第一標記進行退火的引物對進行擴增而得到三次擴增產物；及

序列分析工序，根據所述三次擴增產物確定所述多個目標區域的堿基序列和擴增量，

所述一次擴增工序為將DNA的總量擴增至6000倍以上且30000倍以下的工序，

所述二次擴增工序為將DNA的總量擴增至3倍以上且150倍以下的工序。

2.根據權利要求1所述的胎兒染色體有無非整倍性的檢測方法，其中，

所述三次擴增工序為將DNA的總量擴增至6倍以上且24倍以下的工序。

3.根據權利要求1或2所述的胎兒染色體有無非整倍性的檢測方法，其中，

所述序列分析工序使用新一代測序儀進行。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的胎兒染色體有無非整倍性的檢測方法，該方法還包括：

第二附加工序，對所述三次擴增產物的兩末端附加作為寡核苷酸的第二標記而得到被標記的三次擴增產物。

5.根據權利要求4所述的胎兒染色體有無非整倍性的檢測方法，其中，

所述三次擴增工序中所使用的引物在5’末端具有所述第二標記的堿基序列，

通過進行所述三次擴增工序，所述三次擴增產物的兩末端被附加所述第二標記而得到所述被標記的三次擴增產物，如此一同進行所述三次擴增工序和所述第二附加工序。

6.根據權利要求1至5中任一項所述的胎兒染色體有無非整倍性的檢測方法，其中，

所述二次擴增工序中所使用的引物在5’末端具有所述第一標記的堿基序列，

通過進行所述二次擴增工序，所述二次擴增產物的兩末端被附加所述第一標記而得到所述被標記的二次擴增產物，如此一同進行所述二次擴增工序和所述第一附加工序。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的胎兒染色體有無非整倍性的檢測方法，其中，

所述一次擴增工序為由所述染色體DNA進行全基因組擴增的工序。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的胎兒染色體有無非整倍性的檢測方法，其中，

所述染色體DNA為從1個細胞獲得的染色體DNA，所述一次擴增工序為由1個細胞進行全基因組擴增的工序。

9.根據權利要求1至8中任一項所述的胎兒染色體有無非整倍性的檢測方法，其中，

所述生物樣品為血液，所述染色體DNA為從血液中的細胞獲得的染色體DNA。

10.根據權利要求9所述的胎兒染色體有無非整倍性的檢測方法，其中，

所述血液中的細胞為有核紅細胞。

11.根據權利要求9或10所述的胎兒染色體有無非整倍性的檢測方法，其中，所述血液中的細胞為通過密度梯度離心分離和圖像分析而被分離的細胞。