[發明專利]包含非結構蛋白的片段的登革熱病毒嵌合多表位及其用途

有效

• 申請號: 201580044335.6
• 申請日: 2015-06-22
• 公開（公告）號: CN107074913B
• 公開（公告）日: 2022-02-25
• 發明（設計）人: F·坦吉;A·撒金塔巴伊;E·西蒙-洛列里;C·羅特;P·比希
• 申請（專利權）人: 巴斯德研究院;國立科學研究中心
• 主分類號: C07K14/18
• 分類號: C07K14/18;A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 劉鴻林;張曉威

1.一種嵌合多肽，其由組裝在融合多肽中的以下(a)、(b)和(c)的片段組成，其中所述(a)、(b)和(c)的片段以這個順序直接融合：(a) 登革熱病毒(DENV)血清型1 (DENV1)的非結構(NS) NS3蛋白的兩個片段，其由兩個區域組成，其中第一區域的氨基酸序列如SEQ IDNO: 6中定義，并且第二區域的氨基酸序列如SEQ ID NO: 9中定義，(b) DENV1的NS4b蛋白的片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 12中定義，和(c) DENV1的NS5蛋白的片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO: 15中定義。

2.權利要求1的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽的氨基酸序列是SEQ ID NO: 3。

3.權利要求1的嵌合多肽，其引發針對DENV1、DENV2、DENV3和DENV4的人白細胞抗原(HLA)限制性CD8+和/或CD4+ T細胞應答。

4.分離或純化的多核苷酸，其編碼權利要求1的嵌合多肽。

5.權利要求4的多核苷酸，其中所述多核苷酸的核苷酸序列選自SEQ ID NO: 1或SEQID NO: 2。

6.載體，其是包含權利要求4的多核苷酸的質粒。

7.重組麻疹病毒(MV)基因組載體，其為包含以下的質粒：(i) 編碼MV病毒的全長RNA基因組的cDNA以及(ii) 權利要求4的多核苷酸，所述多核苷酸作為插入物位于所述MV基因組的P和M基因之間或者所述MV基因組的H和L基因之間，其中當重組于所述質粒中時，(i)和(ii)的序列一起遵守六位規則。

8.權利要求7的重組MV基因組載體，其中(ii)的所述多核苷酸作為插入物在額外轉錄單元(ATU)中位于所述MV基因組的P和M基因之間或者所述MV基因組的H和L基因之間。

9.重組MV基因組載體，其為包含以下的質粒：(a) 編碼MV病毒的全長RNA基因組的cDNA以及(b) 編碼DENV抗原的多核苷酸，所述DENV抗原包含融合至DENV1的膜蛋白的胞外域(ectoM)的4種DENV血清型的包膜結構域III (EDIII)多肽的融合物，以及(c) 權利要求4的多核苷酸，其中：- 所述多核苷酸(b)作為插入物位于所述MV基因組的P和M基因之間，并且所述多核苷酸(c)作為插入物位于所述MV基因組的H和L基因之間，或者- 所述多核苷酸(b)作為插入物位于所述MV基因組的P和M基因之間，并且所述多核苷酸(c)作為插入物位于所述MV基因組的P和M基因之間，或者- 所述多核苷酸(b)作為插入物位于所述MV基因組的H和L基因之間，并且所述多核苷酸(c)作為插入物位于所述MV基因組的P和M基因之間，并且其中當重組于所述質粒中時，(a)、(b)和(c)的序列一起遵守六位規則。

10.權利要求9的重組MV基因組載體，其中所述DENV抗原的序列是SEQ ID NO: 145。

11.權利要求7或9的重組MV基因組載體，其包含編碼減毒活Schwarz病毒或Moraten病毒的全長RNA基因組的cDNA。

12.用權利要求4的多核苷酸、權利要求6的載體或者權利要求7或9的重組MV基因組載體遺傳轉化的宿主細胞。

13.權利要求12的細胞，其為HEK-293-T7-MV細胞系。

14.重組麻疹病毒(MV)顆粒，其拯救自表達T7 RNA聚合酶以及MV的N、P和L蛋白的輔助細胞系，并且其進一步表達編碼權利要求6的載體的核酸或編碼權利要求7或9的重組MV基因組載體的核酸。