[發明專利]蛋白質的改良高分泌生產方法

在審

• 申請號: 201580041311.5
• 申請日: 2015-07-29
• 公開（公告）號: CN107075503A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 野中浩一;鈴木健之;津田將志;馬場悟史;市川公久;千葉靖典;橫尾岳彥;伊藤理惠
• 申請（專利權）人: 第一三共株式會社
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N1/19;C12P21/02
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 張桂霞,魯煒

1.轉化酵母，該轉化酵母導入有伴侶基因、且aox1基因被破壞。

2.權利要求1所述的轉化酵母，其中，伴侶基因是選自下述的(a)～(d)所示基因的1種或2種以上的組合：

(a) Ogataea minuta (O. minuta)來源的編碼PDI1、ERO1、Kar2、MPD1、SCJ1、EUG1、或HSP104的基因；

(b) 釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) (S. cerevisia)來源的編碼PDI1、MPD1、SCJ1、ERO1、FKB2、JEM1、LHS1、MPD2、ERJ5、或EUG1的基因；

(c) 人來源的編碼PDI、ERO1-Lα、ERO1-Lβ、或GRP78的基因；

(d) 對于(a)～(c)任一項的基因的核苷酸序列具有95％以上序列同源性的基因。

3.權利要求1所述的轉化酵母，其中，伴侶基因是選自下述的(a)～(g)所示基因的1種或2種以上的組合：

(a) O. minuta來源的編碼PDI1的基因；

(b) O. minuta來源的編碼ERO1的基因；

(c) O. minuta來源的編碼Kar2的基因；

(d) S. cerevisiae來源的編碼PDI1的基因；

(e) 人來源的編碼PDI的基因；

(f) 人來源的編碼ERO1的基因；

(g) 對于(a)～(f)的任一項的基因的核苷酸序列具有95％以上序列同源性的基因。

4.權利要求1所述的轉化酵母，其中，伴侶基因為下述(a)～(g)的任一項的伴侶基因：

(a) O. minuta來源的編碼PDI1的基因、編碼ERO1的基因和編碼Kar2的基因的組合；

(b) O. minuta來源的編碼PDI1的基因和編碼Kar2的基因的組合；

(c) 人來源的編碼PDI的基因和O. minuta來源的編碼ERO1的基因的組合；

(d) O. minuta來源的編碼PDI1的基因和編碼ERO1的基因的組合；

(e) 人來源的編碼PDI的基因、人來源的編碼ERO1-Lβ的基因和人來源的編碼GRP78的基因的組合；

(f) 人來源的編碼PDI的基因、O. minuta來源的編碼ERO1的基因和人來源的編碼GRP78的基因的組合；

(g) 對于(a)～(f)的任一項的基因的核苷酸序列具有95％以上序列同源性的基因。

5.權利要求1～4的任一項中所述的轉化酵母，其中，蛋白酶基因被破壞。

6.權利要求5所述的轉化酵母，其中，蛋白酶基因為prb1基因。

7.轉化酵母，該轉化酵母導入有伴侶基因、且蛋白酶基因被破壞。

8.權利要求7所述的轉化酵母，其中，蛋白酶基因為prb1基因。

9.權利要求1～8所述的轉化酵母，其中，酵母為甲醇營養型酵母。

10.權利要求1～9的任一項中所述的轉化酵母，其中，導入有編碼目標蛋白質的基因。

11.權利要求1～10的任一項中所述的轉化酵母在用于制備目標蛋白質中的應用。

12.蛋白質的制備方法，其特征在于，在培養基中培養權利要求10所述的轉化酵母，從培養物中采取目標蛋白質。

13.權利要求12所述的蛋白質的制備方法，其特征在于，在抑制蛋白酶活性的條件下進行培養。

14.權利要求12或13所述的蛋白質的制備方法，其特征在于，在pH值為6.0～7.5的培養基中進行培養。

15.權利要求12～14的任一項中所述的蛋白質的制備方法，其特征在于，向培養基中添加氮源。

16.權利要求12～15的任一項中所述的蛋白質的制備方法，其特征在于，培養基中的甲醇添加量為2％(v/v)以下。