[發(fā)明專利]酰基氨基酸的生物合成生產(chǎn)

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201580039323.4
• 申請日: 2015-04-28
• 公開（公告）號: CN107075463A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: L.賴內(nèi)克;S.沙費爾;K.格拉曼;M.奧爾費爾特;N.德克;N.阿爾托;H-G.亨內(nèi)曼
• 申請（專利權(quán)）人: 贏創(chuàng)德固賽有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N9/00;C12N9/10;C12N9/88;C12P13/04;C12R1/19
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 邵長準(zhǔn),羅文鋒

1.一種用于生產(chǎn)?；拾彼猁}的細胞，其中所述細胞經(jīng)遺傳修飾以包含

- 至少與野生型細胞相比增加氨基酸-N-酰基-轉(zhuǎn)移酶的表達的第一基因突變，

- 至少與野生型細胞相比增加酰基輔酶A合成酶的表達的第二基因突變，和

- 至少與野生型細胞相比減少選自以下的至少一種酶的表達的第三基因突變：甘氨酸裂解系統(tǒng)的酶、甘氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶(GlyA)、蘇氨酸醛縮酶(LtaE)、蘇氨酸脫氫酶(Tdh)、2-氨基-3-酮丁酸鹽輔酶A-連接酶(Kbl)和別蘇氨酸脫氫酶(YdfG)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的細胞，其中所述來自甘氨酸裂解系統(tǒng)的酶選自：甘氨酸裂解系統(tǒng)T蛋白、甘氨酸裂解系統(tǒng)H蛋白和甘氨酸裂解系統(tǒng)P蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細胞，其中所述第三基因突變相對于野生型細胞減少甘氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶(GlyA)、蘇氨酸醛縮酶(LtaE)、甘氨酸裂解系統(tǒng)T蛋白、甘氨酸裂解系統(tǒng)H蛋白和甘氨酸裂解系統(tǒng)P蛋白的表達。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細胞，其中所述甘氨酸裂解系統(tǒng)T蛋白與SEQ ID NO:58具有85%序列同一性，所述甘氨酸裂解系統(tǒng)H蛋白與SEQ ID NO:59具有85%序列同一性，且所述甘氨酸裂解系統(tǒng)P蛋白與SEQ ID NO:60具有85%序列同一性。

5.根據(jù)前述權(quán)利要求中的任一項所述的細胞，其中所述甘氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶(GlyA)與SEQ ID NO:61具有85%序列同一性和/或所述蘇氨酸醛縮酶(LtaE)與SEQ ID NO:62具有85%序列同一性。

6.根據(jù)前述權(quán)利要求中的任一項所述的細胞，其中所述細胞與野生型細胞相比具有降低的脂肪酸降解能力。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的細胞，其中所述降低的脂肪酸降解能力是與野生型細胞相比減少選自以下的至少一種酶的表達的結(jié)果：?；o酶A脫氫酶、2,4-二烯酰輔酶A還原酶、烯酰輔酶A水合酶和3-酮酰基輔酶A硫解酶。

8.根據(jù)前述權(quán)利要求中的任一項所述的細胞，其中所述氨基酸-N-酰基-轉(zhuǎn)移酶是人氨基酸-N-?；?轉(zhuǎn)移酶。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的細胞，其中所述氨基酸-N-?；?轉(zhuǎn)移酶與SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64具有85%序列同一性和/或所述酰基輔酶A合成酶與SEQ ID NO:65具有85%序列同一性。

10.根據(jù)前述權(quán)利要求中的任一項所述的細胞，其中所述細胞是細菌細胞。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的細胞，其中所述細胞是大腸桿菌。

12.根據(jù)前述權(quán)利要求中的任一項所述的細胞，其中所述細胞進一步經(jīng)遺傳修飾以包含第四基因突變以與野生型細胞相比增加至少一種轉(zhuǎn)運蛋白的表達，其中所述轉(zhuǎn)運蛋白選自FadL和AlkL。

13.根據(jù)前述權(quán)利要求中的任一項所述的細胞，其中所述?；被崾窃鹿瘐；拾彼猁}。

14.根據(jù)前述權(quán)利要求中的任一項所述的細胞，其中所述細胞能夠制備蛋白質(zhì)氨基酸和/或脂肪酸。

15.一種用于生產(chǎn)酰基氨基酸的方法，所述方法包括在有根據(jù)權(quán)利要求1-14中的任一項所述的至少一種細胞存在下接觸氨基酸和脂肪酸和/或其酰基輔酶A。