[發明專利]用于通過使用已缺失BST2基因功能的細胞系來促進病毒感染和增加病毒產生的方法

有效

• 申請號: 201580039241.X
• 申請日: 2015-06-02
• 公開（公告）號: CN106661558B
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 樸世鎬;李殷妃
• 申請（專利權）人: 易木農麥克斯有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N5/10;C12N15/85;C12P21/00;A61K39/12
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 陳桉

本發明涉及用于通過使用已缺失Bst2基因功能的細胞系來促進病毒感染和增加病毒產生的方法且更具體地涉及用于通過從能產生病毒的細胞系去除Bst2基因來促進靶病毒感染和增加靶病毒產生及促進病毒出芽和抑制宿主細胞凋亡的方法。根據本發明，用于通過使用已缺失Bst2基因功能的動物細胞系來促進靶病毒感染和增加靶病毒產生的方法能提高靶病毒和抗原蛋白的產量且由此能用于制備用于治療和預防病毒性疾病的疫苗。

技術領域

本發明涉及通過使用缺失Bst2基因功能的細胞系來促進病毒感染和病毒產生的方法且更具體地涉及從能產生病毒的細胞去除Bst2基因由此促進病毒從細胞的釋放、抑制細胞的凋亡、促進對細胞的病毒感染和增加細胞中的病毒產生的方法。

背景技術

當病毒感染身體時，在受感染的細胞中發生病毒增殖且所增殖的病毒顆粒經細胞膜出芽以感染其它周圍的細胞。在細胞針對病毒感染的一些防御機制中，Bst2(tetherin)蛋白在細胞膜中表達。Bst2蛋白在N末端和C末端均具有膜結合位點且由此在細胞膜中以中間抬起(像一座橋)的形式表達。Bst2的C末端位于細胞膜的脂筏區即其中發生受體激活的特定區域且N末端位于非脂筏區。當病毒從脂筏區出芽至細胞外時，Bst2蛋白通過其固定于非脂筏區的區域來抑制病毒顆粒通過細胞膜。對于哺乳動物細胞的這種防御機制，一些病毒產生促進Bst2蛋白降解的蛋白從而逃避宿主細胞的此種機制。這反過來表明Bst2基因的功能強效地促進對病毒產生的抑制。

迄今，為了產生病毒以生產疫苗，已使用將病毒種接種至受精的雞蛋中并培養接種的病毒的方法(KR 2012-0103737A)。然而，這種方法由于一些問題而非常低效，所述問題包括引起過敏、受精的雞蛋的供應安全性和病毒傳播。在嘗試克服此類問題的過程中已使用通過動物細胞培養來生產病毒疫苗的方法(KR 2012-0033334A)。這些方法包括通過在無菌條件下培養大量動物細胞并用病毒感染所培養的動物細胞來生產疫苗的方法、通過遺傳工程方法僅產生使針對病原體的抗體得以產生的抗原的方法等。通過動物細胞培養來生產疫苗的方法的最大優點是可擴大生產規模。具體地，生產規模可根據用作疫苗生產原料的動物細胞的培養規模來按需擴大。

然而，盡管有這么多優點，但是通過動物細胞培養來生產疫苗不是容易實現的。這是因為每單位體積的產量是較低的。為了在使用動物細胞來生產疫苗時克服每單位體積的低產量，嘗試了使用遺傳工程技術來開發優異的宿主動物細胞系(Jang J.等人,Appl.Microbiol.Biotechnol 85:1509-1520,2010)，但是此類嘗試仍然處于不足的水平。因此，為了優化病毒產生，需要鑒定病毒產生細胞系、改善培養條件和改善感染條件。

在先前研究中，本發明人發現當能產生病毒的細胞系中的Bst2基因的功能喪失時，病毒從細胞系的釋放得以促進，使得產生病毒的能力增加且宿主細胞的凋亡得以抑制，使得病毒產生細胞系的穩定性增加(WO 2014142433)。

因此，本發明人已進行了大量努力以找到用于通過提高用于使用動物細胞系生產疫苗的靶病毒的產量來產生病毒和產生病毒抗原性蛋白的最佳方法且由此已發現若去除動物細胞系中的Bst2蛋白，則會促進病毒從動物細胞系的釋放，會抑制宿主細胞的凋亡，會顯著促進宿主細胞的病毒感染并會增加靶病毒的產生，從而完成本發明。

發明內容

技術問題

本發明的目的是提供用于促進靶病毒感染的方法，該方法包括用靶病毒感染缺失Bst2基因功能且能產生病毒的細胞系。

本發明的另一個目的是提供用于增加靶病毒產生的方法，該方法包括：用靶病毒感染缺失Bst2基因功能且能產生病毒的細胞系；及培養所感染的細胞系。

本發明的另一個目的是提供用于產生抗原性蛋白的方法，該方法包括：用靶病毒感染缺失Bst2基因功能且能產生病毒的細胞系；及培養所感染的細胞系。