[發(fā)明專利]檢測宮頸中的癌變的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201580036986.0 | 申請日： | 2015-05-07 |
| 公開（公告）號： | CN107003313A | 公開（公告）日： | 2017-08-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 文森佐·麥卡里尼;朱塞佩·迪貝內(nèi)德托 | 申請（專利權(quán)）人： | 文森佐·麥卡里尼;朱塞佩·迪貝內(nèi)德托 |
| 主分類號： | G01N33/574 | 分類號： | G01N33/574 |
| 代理公司： | 北京鍾維聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11579 | 代理人： | 羅銀燕 |
| 地址： | 意大利*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 檢測 宮頸 中的 癌變 方法 | ||
1.在經(jīng)受宮頸癌篩選的女性中，檢測由人乳頭瘤病毒(HPV)引起的瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化的方法，所述方法包括，在取自被檢查的患者的宮頸上皮的鱗狀-柱狀結(jié)合處的細(xì)胞樣本中，檢測由蛋白E6與蛋白p53組成的蛋白復(fù)合物E6/p53和/或由蛋白E7與蛋白pRB組成的蛋白復(fù)合物E7/pRB的存在，其中所述兩種蛋白復(fù)合物中的至少一種的檢出表明，在所檢查的患者中，癌變已變得不可逆，通過抗體抗蛋白E6和抗體抗蛋白E7的組合使用，優(yōu)選抗體抗蛋白p53和抗體抗蛋白pRB的組合使用進(jìn)行所述檢測。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其包括蛋白印跡技術(shù)所述的下述操作：
a)制備取自被檢測的患者的宮頸上皮的鱗狀-柱狀結(jié)合處的細(xì)胞樣本，并將其置于生理溶液中；
b)從所述樣本提取蛋白并且使獲得的所述蛋白變性；
c)使由此獲得的變性蛋白進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳；
d)將從前面操作獲得的所述蛋白轉(zhuǎn)移在膜上并且中和所述膜的空位點(diǎn)；
e)通過以下步驟鑒定所述蛋白：將所述蛋白與至少下述抗體孵育：
第一單克隆抗體抗蛋白E6；
第一單克隆抗體抗蛋白E7；
然后與綴合有生物素或信使酶如堿性磷酸酶的第二抗IgG抗體孵育；
f)使來自前面操作的產(chǎn)物進(jìn)行比色檢測或化學(xué)發(fā)光檢測；
其中顯示蛋白E6和E7中的至少一種的雙反應(yīng)條帶的所述檢測的結(jié)果表明，在檢查的患者中，癌變已變得不可逆，所述雙條帶包含第一條帶和第二條帶，所述第一條帶與所探尋的蛋白即E6或E7的分子量對應(yīng)，以及所述第二條帶對應(yīng)的分子量不同于且高于第一條帶的各蛋白的所述分子量，所述分子量基本上等于蛋白復(fù)合物E6/p53的71kD以及等于蛋白復(fù)合物E7/pRB的115,5kD。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中在顯示蛋白E6和E7的權(quán)利要求2所限定的雙反應(yīng)條帶的所述檢測中的結(jié)果，以較高的安全性表明，在所檢查的患者中，癌變已變得不可逆。
4.如權(quán)利要求2或3所述的方法，其中在所述步驟e)中，所述蛋白還與下述抗體孵育：
第一單克隆抗體抗蛋白p53；
第一單克隆抗體抗蛋白pRb；
進(jìn)一步的操作類似于所述第一單克隆抗體抗蛋白E6和抗蛋白E7孵育的情況進(jìn)行的操作，并且顯示蛋白p53和pRb中的至少一種的雙反應(yīng)條帶的所述檢測的結(jié)果表明，在檢查的患者中，癌變已變得不可逆，所述雙條帶包含第一條帶和第二條帶，所述第一條帶與所探尋的蛋白p53或pRb的分子量對應(yīng)，所述第二條帶對應(yīng)的分子量不同于且高于所述第一條帶的各蛋白的所述分子量。
5.如權(quán)利要求2-4中任一項(xiàng)所述的方法，其中顯示蛋白E6和E7的單一反應(yīng)條帶的所述檢測的結(jié)果表明，在所檢查的患者中，癌變尚未開始或者尚未變得不可逆，所述單一條帶與所探尋的蛋白E6或E7的分子量對應(yīng)。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中未顯示蛋白E6和E7的任何反應(yīng)條帶的所述檢測的結(jié)果表明，在所檢查的患者中，沒有發(fā)生病毒DNA與細(xì)胞DNA的整合。
7.如權(quán)利要求2-4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述操作e)的第二抗IgG抗體綴合有堿性磷酸酶，以及其中操作f)的所述檢測是比色檢測或化學(xué)發(fā)光檢測。
8.如權(quán)利要求2或3所述的方法，其中所述第一單克隆抗體抗蛋白E6是病毒型HPV16和HPV18的小鼠抗蛋白E6抗體，以及所述第一單克隆抗體抗蛋白E7是病毒型HPV16和HPV18的小鼠抗蛋白E7抗體。
9.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述第一單克隆抗體抗蛋白p53是小鼠單克隆抗人蛋白p53抗體，以及所述第一單克隆抗體抗蛋白pRb是小鼠單克隆抗人蛋白pRb抗體。
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