[發明專利]包含N?乙酰半胱氨酸的細胞培養方法和培養基

在審

• 申請號: 201580032159.4
• 申請日: 2015-06-17
• 公開（公告）號: CN106715707A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: B.霍爾曼;李楨
• 申請（專利權）人: 免疫醫療公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12N5/00;C12N5/02
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 梁謀,魯煒

對以電子方式提交的序列表的引用

與本申請一起提交的ASCII文本文件的以電子方式提交的序列表內容(名稱：IL13-310P1_SL.txt；大小：15,073字節；以及創建日期：2014年6月11日)通過引用以其整體結合在此。

背景

許多重要的基于蛋白質的生物治療劑在細胞培養物中產生。這些治療劑包括但不限于重組蛋白和抗體治療劑。與傳統的小分子治療劑相比，在細胞培養物中產生生物治療劑增加了制造商業產品和臨床候選物的成本。重要的限制因素之一是在生產設施中由細胞冷凍貯存物放大生產運行所花費的時間，以及由用于生產重組蛋白和抗體治療劑的細胞的相對緩慢生長所引起的高度設備占用率和利用率。因此，需要開發增加細胞活力和/或細胞生長率(引起細胞倍增時間減少)以減少生產放大的時間線、設備占用率或利用率并降低成本的優化的細胞培養方法和試劑。通常使用血清或其他動物蛋白成分增強細胞在實驗室環境中生長的能力。然而，由于監管擔憂或潛在安全性問題，細胞培養基和試劑在生產生物治療劑時通常并不含有血清或其他動物蛋白成分。動物蛋白組分的去除使得細胞更難以在培養物中生長并且使得細胞更難以由冷凍貯存物解凍并開始生長，從而降低產物產率并增加設備占用率、利用率和成本。因此，準確地說當生產效率變得最重要時，細胞培養基成分受到了限制。因此，本領域面臨著對用于產生基于蛋白質的生物治療劑諸如異源蛋白和抗體治療劑的細胞系的細胞培養成分進行優化的挑戰。實際上，大量培養基組分的參與、細胞代謝途徑的復雜性和各種培養基組分與復雜細胞途徑之間的相依性通常使得優化細胞培養試劑或方法非常困難。在此背景下，在此提供了包含N-乙酰半胱氨酸(NAC)的細胞培養基和細胞培養方法，該N-乙酰半胱氨酸當被添加到涉及膽固醇營養缺陷型細胞、骨髓瘤細胞或雜交瘤細胞的細胞培養基中和/或被用于涉及這些細胞的細胞培養方法中時出人意料地增加了細胞活力、細胞生長率并減少了細胞倍增時間。

其他人已建議將N-乙酰半胱氨酸作為一般氨基酸來源(參見，例如EP 2351827；在低于在此所用的數量級的量下)或作為一般還原劑(參見，例如，EP1434856、WO2012095731、US20060258003)添加到細胞培養基中，以分別支持T細胞、神經元祖細胞/干細胞、或肌肉祖細胞/干細胞的生長。相比之下，在此提供了包含N-乙酰半胱氨酸的細胞培養基和細胞培養方法，這些細胞培養基和細胞培養方法增加膽固醇營養缺陷型細胞、骨髓瘤細胞或雜交瘤細胞的細胞活力、細胞生長率并減少細胞倍增時間。如在此所述的(參見，例如實例1-6)，N-乙酰半胱氨酸當被添加到已含有氨基酸和還原劑的細胞培養基中時出人意料地增加了NSO細胞的細胞活力、細胞生長率并減少細胞倍增時間。

概述

說明書和權利要求書提供了包含N-乙酰半胱氨酸(NAC)的各種細胞培養基和方法，其中下文提供了這些培養基和方法中的一些的概述。根據說明書，一個實施例提供了一種細胞培養方法，該方法包括：(a)提供一種足以支持細胞生長的細胞培養基，其中該細胞培養基包含N-乙酰半胱氨酸；并且(b)在該細胞培養基中培養細胞，其中該細胞是膽固醇營養缺陷型細胞、骨髓瘤細胞或雜交瘤細胞。在另一個實施例中，一種增加細胞活力的方法包括：(a)提供一種足以支持細胞生長的細胞培養基，其中該細胞培養基包含N-乙酰半胱氨酸；并且(b)在該細胞培養基中培養細胞，其中該細胞是膽固醇營養缺陷型細胞、骨髓瘤細胞或雜交瘤細胞。在另一個方面中，一種增加細胞生長率的方法包括：(a)提供一種足以支持細胞生長的細胞培養基，其中該細胞培養基包含N-乙酰半胱氨酸；并且(b)在該細胞培養基中培養細胞，其中該細胞是膽固醇營養缺陷型細胞、骨髓瘤細胞或雜交瘤細胞。在另一個實施例中，一種減少細胞倍增時間的方法包括：(a)提供一種足以支持細胞生長的細胞培養基，其中該細胞培養基包含N-乙酰半胱氨酸；并且(b)在該細胞培養基中培養細胞，其中該細胞是膽固醇營養缺陷型細胞、骨髓瘤細胞或雜交瘤細胞。于在此所披露的方法的一個實施例中，該細胞是膽固醇營養缺陷型細胞。于在此所披露的方法的另一個實施例中，該細胞是骨髓瘤細胞。于在此所披露的方法的另一個實施例中，該細胞是雜交瘤細胞。

在一個實施例中，這些細胞是由冷凍貯存物解凍的。在另一個實施例中，這些細胞處于擴增階段。在另一個實施例中，該細胞培養基是無血清且無動物蛋白的培養基。在另一個實施例中，該細胞培養基是化學限定培養基。在另一個實施例中，該培養基包含脂質。