[發明專利]溶瘤病毒

有效

• 申請號: 201580029323.6
• 申請日: 2015-04-01
• 公開（公告）號: CN106795527B
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 王堯河;袁明;賈漢吉爾·艾哈邁德;尼古拉斯·羅伯特·勒莫因
• 申請（專利權）人: 瑪麗女王倫敦大學
• 主分類號: C12N15/863
• 分類號: C12N15/863;A61K48/00;A61K35/768;A61P35/00
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 王雯雯

本發明涉及用于癌癥治療的溶瘤痘苗病毒和病毒載體，其中該病毒包括位置取向相同的至少三個痘苗病毒啟動子。

技術領域

本發明涉及癌癥治療。特別地，本發明涉及用于癌癥治療的溶瘤性痘苗病毒和病毒載體。

背景技術

盡管微創手術、超分割放療和化療藥物新組合方面取得了進展，但是許多類型的實體瘤患者的存活率仍保持不變。溶瘤病毒是治療對常規治療有抗性的癌癥的一種有吸引力的治療劑。溶瘤病毒是能夠特異性靶向并殺死癌細胞的病毒。此外，溶瘤病毒還可以提供提高宿主自身抗癌反應所必需的免疫刺激信號。

痘苗病毒是雙鏈DNA病毒，其具有許多使其具有溶瘤治療吸引力的候選項的特征。其能夠快速復制，有效擴散到腫瘤以及強溶解能力。此外，痘苗已經得到廣泛研究，并且具有被清楚理解的分子生物學，具有高克隆能力和多種商業可用的天然和合成啟動子，使其成為攜帶異源核酸序列的載體的理想選擇。痘苗具有良好的安全性，并且容易獲得對不受控制的感染的治療。此外，通常在實體瘤中發現的缺氧微環境，不利于許多類型的溶瘤病毒的復制和發揮功效，但不會對痘苗病毒的復制和功效不利。

已報道了溶瘤痘苗病毒的幾種菌株，例如Western Reserve，Wyeth和Lister菌株。已經創建了每一種所述菌株的各種缺失突變體。McCart等人(Cancer Res.2001,61；8751-8757)描述了一種在胸苷激酶(TK)基因和病毒生長因子(VGF)基因中具有缺失的WesternReserve(WR)株。這些缺失突變體能夠有效地交叉觸發針對腫瘤抗原的免疫系統。然而，生物分布研究表明，其在正常卵巢組織中具有顯著病毒滴度而在骨髓中則較小，提高了痘苗病毒治療后發生不育和骨髓抑制的預期。Hung等人(Gene Therapy,2007,14；20–29)描述了一種TK缺陷型痘苗Lister菌株。然而，觀察到該菌株還在卵巢腫瘤之外的正常卵巢中定位。

將異源基因例如細胞因子編碼基因插入病毒中，可以進一步驅動免疫應答。然而，細胞因子的插入可以通過早期病毒清除來降低病毒復制功效。這確實已用”武裝”有一些免疫調節基因如IL-2，IL-15，TNF和CD40配體的痘苗病毒在體內觀察到。

盡管溶瘤病毒領域已經取得了進展，但是市場上尚無基于痘苗的治療產品。因此，需要更有效的溶瘤性痘苗來治療癌癥。

發明內容

本發明提供改進的溶瘤性痘苗病毒。本申請的發明人驚奇地發現，在腫瘤組織中，具有失活的N1L基因的TK缺陷型痘苗病毒株顯示出比現有技術更強的選擇性和抗腫瘤功效。本發明還提供了痘苗病毒載體。

具體實施方式

本發明的第一方面提供了包含至少三種痘苗病毒啟動子的核酸序列，其中所述至少三種啟動子以相同取向位于核酸序列中。

線性DNA具有兩種可能取向：5'至3'方向和3'至5'方向。例如，如果一個啟動子位于5'至3'方向，并且如果第二啟動子也位于相同多核苷酸分子/鏈內的5'至3'方向，則兩個啟動子的位置具有相同取向。

核酸序列可以是天然的、合成的或重組的。它可以是例如cDNA、PCR產物或基因組序列。其可以是分離的，或作為質粒、載體或宿主細胞的一部分。質粒是具有獨立于染色體DNA復制的能力的環狀染色體外DNA分子。

質粒可用于將表達盒導入宿主細胞。質粒也可以用于在宿主細胞中表達多肽。例如，可以用能夠編碼特定多肽的質粒轉染細菌宿主細胞，以便表達該多肽。該術語還包括能夠容納DNA更長部分的酵母人工染色體和細菌人工染色體。

啟動子是具有可啟動特定基因轉錄的特異性序列的DNA區域。用于在痘苗中表達異源基因的啟動子，包括控制早期和晚期轉錄活性的啟動子，例如mH5、H5、P7.5和PE/L。本申請所述的異源基因，是病毒中通常不存在的基因。修飾的H5啟動子(mH5)主要具有早期活性，且具有比天然存在的H5更高的穩定性。優選地，所述至少三個啟動子是mH5。