[發明專利]用于轉基因表達的合成啟動子構建體

在審

• 申請號: 201580027291.6
• 申請日: 2015-04-07
• 公開（公告）號: CN107075524A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 雅克布斯·彼得勒斯·齊威格勒;莫里茨·文特爾
• 申請（專利權）人: 阿扎根生物技術（控股）有限公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N5/10;C07K14/785;A01H5/00
• 代理公司: 北京聿宏知識產權代理有限公司11372
• 代理人: 吳大建

相關申請的交叉引用

本申請要求在2014年5月19日提交的南非臨時專利申請號2014/03606的權益，此申請的全部內容以引用的方式并入本文。

技術領域

本發明涉及植物中基因表達的調節。

背景技術

植物中不可靠和低水平的組成型轉基因表達是用于作物改良和生物制藥的植物生物技術的主要挑戰之一。若干個分子元件可發揮作用，但轉基因的低水平表達主要是由于弱的啟動子。目前，可用的啟動子的選擇是有限的，并且這些啟動子中的大多數基于常規野生型啟動子元件，其中花椰菜花葉病毒35S(CaMV 35S)是最廣泛使用的啟動子中的一種。

然而，存在對驅動高于其能夠通過野生型甚至修改版本的CaMV 35S的水平的轉基因表達的需要，特別是對于生物制藥應用。

發明內容

本文公開了用于增強植物中的轉基因表達的合成啟動子構建體；包含合成啟動子構建體的表達盒；和使用合成啟動子構建體在植物中表達轉基因蛋白的方法。

本文提供了包含調節核酸序列的分離的多核苷酸，所述調節核酸序列(a)與SEQ ID NO:1、3、4或18中任一個示出的多核苷酸序列或其功能等價片段具有至少95％或更多的序列同一性，或(b)在嚴格條件下與SEQ ID NO:1、3、4或18中任一個示出的多核苷酸序列的互補序列雜交。

在一些實施方案中，調節核酸序列與SEQ ID NO:1、3、4或18中任一個或其功能等價片段具有95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在一些實施方案中，調節核酸序列與SEQ ID NO:1、3、4或18中任一個或其功能等價片段具有100％的序列同一性。

在一些實施方案中，調節核酸序列或其功能等價片段含有選自由以下組成的組的一個或多個基序：SORLREP2AT、ASF1MOTIFCAMV、AS1CAMV、ATRICHPSPETE、GT1MOTIFPSRBCS、INRNTPSADB、CTRMCAMV35S、-10PEHVPSBD、LTREATLTI78、CBFHV、DRECRTCOREAT、LTRECOREATCOR15、MYCCONSENSUSAT、LRENPCABE、SORLIP1AT、BOXIIPCCHS、CCA1ATLHCB1、CGF1ATCAB2、GT1CONSENSUS、IBOXCORE、RBCSCONSENSUS、CIACADIANLELHC、GATABOX、SORLIP5AT以及CACTFTPPCA1。

分離的多核苷酸還可包含一個或多個限制酶位點以用于插入與調節核酸序列異源的第二核酸序列，使得插入的第二核酸序列將可操作地連接到調節核酸序列，并且調節核酸序列能夠指導第二可操作連接的核酸序列的轉錄。

在一些實施方案中，第二核酸序列編碼與調節核酸序列異源的靶蛋白，并可操作地連接到調節核酸序列。例如，第二核苷酸序列可編碼可用于食品或飲料工業、制藥工業(例如作為疫苗或治療性蛋白)、農業或化學工業的靶蛋白。在一些實施方案中，第二核苷酸序列編碼治療性蛋白。在一些實施方案中，第二核苷酸序列編碼(A)肺表面活性蛋白-B(SP-B)前蛋白原或其功能片段或類似物；(B)SP-B成熟肽或其功能片段或類似物；或(A)和(B)兩者的一種或多種拷貝。

在一些實施方案中，分離的多核苷酸還包含終止子序列，例如選自Nos聚A、35S聚A、RbcS1終止子或本領域的技術人員已知的另一種終止子的終止子序列。調節核酸序列或其功能等價片段可以可操作地連接到終止子序列。

分離的多核苷酸還可包含以下元件中的一個或多個：

(i)編碼信號肽的多核苷酸序列，諸如equistatin的信號肽區或煙草硫堇(Nicotiana tabacum thionin)(NtSP)的信號肽區；